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Transgenic and Experimental Animal Unit

MEMBERS

  • Martina Crispo, DVM, PhD (Head)
  • Geraldine Schlapp, MSc (Full time technician)
  • María Noel Meikle, MSc (Technician)
  • Ana Paula Arévalo, TMN (Technician)
  • Gabriel Fernández, Biol (Technician)
  • Ana Paula Mulet, MSc (Research assistant)
  • Sergio Ancheta (Animal caretaker)
  • Gisell González (Animal caretaker)
  • Mario Borges (Animal caretaker)
  • Micaela Sureda, Biol (Research internship)
  • Natalibeth Barrera, Biol (MSc Student)
  • Pedro Dos Santos, DVM, MSc (PhD student)
  • Federico Cuadro, DVM (MSc Student)

MAIN EQUIPMENT

Animal Facility

  • Individually Ventilated Cage (IVC) Racks
  • Double-entrance autoclave
  • SAS-UV
  • Water filtration system
  • Environmental conditions controlling system

Laboratory

  • Inverted microscope and micromanipulators
  • Pipette puller and microforge
  • Stereomicroscopes
  • Embryo incubator (5% CO2)
  • Laminar flow cabinet
  • Controlled-rate freezing system

SERVICES

  1. Generation of transgenic mice by CRISPR/Cas9 technology
  2. Generation of transgenic mice by pronuclear microinjection of DNA fragments
  3. Generation of transgenic mice by gene-targeting in embryonic stem cells
  4. Generation of transgenic mice by Sleeping Beauty Transposons technology
  5. Embryo and sperm cryopreservation
  6. Rederivation of mouse lines
  7. In vitro fertilization
  8. Breeding and housing of SPF and conventional mice (C57BL/6J, BALB/cJ, DBA/2J, Nude, several hybrids and aprox. 30 different transgenic lines). Actual production: aprox. 2000/month.
  9. Four trials of acute safety of probiotic bacteria for Biopolis Company
  10. Estudio de la actividad hipolipemiante, capacidad antioxidante y actividad anti-inflamatoria de los componentes del extracto de pericarpio derivado de girasol “violeta” (EPGv)”.
  11. Trials of biological activity for recombinant eritropoyetin (Lab. Clausen & LCB) (aprox. 12 per month). The animal facility is certified by the Ministry of Health.
  12. Trials of toxicity for biotechnological products (EPO, Filgen, Interferon) for Lab. Clausen & LCB (10 per month).

Service request forms

1) Solicitud de animales

2) Solicitud importación ratones transgénicos

3) Solicitud de edición génica en ratones mediante CRISPR/Cas9

4)  Solicitud de producción de ratones transgénicos por microinyección pronuclear

5) Solicitud de gene targeting en células madre embrionarias

6) Solicitud de producción de ratones quiméricos

7) Solicitud congelación y almacenamiento de esperma

8) Solicitud de criopreservación y almacenamiento de embriones

9) Solicitud descongelación y rederivación de embriones

10) Solicitud rederivación de embriones

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RESEARCH

During 2014 one full article and two abstracts in peer review journals were published, with a MSc thesis and two ANII research initiation fellowships finished and others posgraduate thesis starting and running.

One of the major achievements of the Unit during 2014 was that the firsts CRISPR/Cas9 Myostatin Knockout sheep probably in the world were born, a recent technology that promises to revolutionize the world of transgenesis. This project is carried out in collaboration with Alejo Menchaca from IRAUy and Ignacio Anegón from INSERM group in Nantes. The data led to a full article that will be submitted during 2015 and new interesting projects being discussed for 2015.

During 2014 we managed to increase the efficiencies in transgenic technologies as pronuclear DNA microinjection, improving embryo survival rate from 50 to 85% after some major modifications in the microinjection settings. This improvement will allow us to reach more clients in the region with better results.

We increased the animal facility conventional area in aprox. 90 mt2 to attend the demand for new PI’s that uses mice and also rats, introducing in 2015 a new species in the animal house. We recluted more technicians to cover the amount of work demanded.

We continue working with national and international biotechnological companies, with grants close to 100.000 USD and the services offered resulting in new projects presented at ANII Aliances for 2015, with an estimated amount of 200.000 USD shared with others facilities of IPMon.

We obtained a EUR 30.000 RIIP grant to organize during 2015 a high level International Course: ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – and an International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS. This is the first time a course with these characteristics is being dictated in our region, triggering lot of interest.

The third edition of the internal course for researchers of Institut Pasteur was organized: Manejo, técnicas de administración de sustancias y obtención de muestras en ratones, being mandatory for working with mice at our facility. Several lectures for undergraduated and posgraduated students were given by members of the UATE.

In summary, the efficiency of the transgenic services was improved substantially, animal house convencional area was increased, research was maintained, human resources formation continues developing and original information was published during the period.

Projects

  • 2012-2016 Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690. PhD thesis, Co-Tutor.
  • 2014-2016 Evaluación por imagenología molecular del diabody anti-Tn en modelo murino de cáncer de pulmón. MSc thesis, Co- tutor.
  • 2014-2016 Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. MSc thesis, Co-tutor.
  • 2014- 2016 Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embriones in vitro. MSc thesis, Co-tutor.
  • 2012 – 2014 Criopreservación de embriones ovinos producidos in vitro en diferentes estadios mediante dos métodos de vitrificación. MSc thesis, Co –tutor.
  • 2013-2014 Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Research Initiation fellowship, Tutor.
  • 2013-2014 Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Research Initiation fellowship, Co-tutor.
  • 2011-2014 Una innovación tecnológica para la reproducción ovina en Uruguay: producción in vitro de embriones y su aplicación a gran escala. Co-responsable
  • 2012-2014 Applied environmental toxicology: risk evaluation to environmental antropogenic estrogen exposition in a transgenic murine model Oct4-GFP. Collaboration.
  • 2009-to date Trypanothione biosynthesis as a basis for drugs against trypanosomes. Collaboration.
  • 2008-to date Colon anticancer immunotherapy using Trypanosoma cruzi antigens. Collaboration.

EDUCATION-COURSES

HUMAN RESOURCES FORMATION

  • Ana Paula Mulet, MSc – Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690. PhD Thesis (2012-2016). UdelaR PRO.IN.BIO (Co-Tutor).
  • Pedro Claudino dos Santos Neto, DMV – Criopreservacion de embriones ovinos. MSc Thesis (2011-2014), Facultad de Veterinaria – UDeLaR (Co-Tutor).
  • Pia Jacques, student – Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Research initiation fellowship (2013-2014), ANII (Tutor).
  • Pia Jacques, student – Obtención de herramientas moleculares para el estudio del estado redox de tripanosomátidos. Degree thesis (2012-2014).
  • Tali Korytnicki, Biol – Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Research initiation fellowship (2013-2014), ANII (Co-tutor).
  • Tali Korytnicki, Biol – Derivación de Células Madre Embrionarias (ESC) murinas como alternativa a su adquisición en otros laboratorios para uso en la producción de ratones genéticamente modificados. Degree thesis (2012-2014) (Co-tutor).
  • Natalibeth Barrera, Biol – Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embriones in vitro. MSc thesis, Co-tutor.
  • Federico Cuadro, DVM – Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. MSc thesis, Co-tutor
  • Fabricio Maschi, DVM – Tecnologías embrionarias murinas. Internship, Tutor.

MEETINGS

    • XIII International Society for Transgenic Technologies Meeting- Prague, Czech Republic. 2016. Presentación de Posters: “CRISPRs system improves the overall efficiency in small transgenic facilities, Impaired pregnancy and birth rates in Swiss Webster mice used for embryo transfer“.

    • XII International Society for Transgenic Technologies Meeting -Edinburgh, UK. 2014. Presentación de Posters: “Slow freezing versus vitrification of transgenic mouse embryos obtained by in vitro fertilization (IVF) intended for rederivation use“, “Environmental enrichment effects on reproductive performance of foster females used in transgenesis and rederivation techniques“.
    • II Congreso FESSACAL y IV Congreso de la Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL), Buenos Aires, Argentina, 2014. Presentación de poster: “Eficiencia de la técnica de fertilización in vitro (FIV) mediante esperma congelado en murinos”. 
    • XV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias, September, Piriapolis, Uruguay, 2014. Presentación oral y poster: “Desarrollo de modelos murinos en la Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación (UATE)
    • XII Congresso da Sociedade Brasileira de Ciência em Animais de Laboratório (SBCAL), Foz do Iguaçu, Brasil, 2012. Presentación de poster. “Eficiencia de técnicas de transgénesis en el Institut Pasteur de Montevideo“.
    • IX International Society for Transgenic Technologies Meeting, Berlin, Germany,  2010. Presentación oral. “Running a transgenic mice facility in Uruguay, South America. A fulfilled challenge“.

ORAL PRESENTATIONS IN NATIONAL AND INTERNATIONAL MEETINGS

  • Banco de esperma y embriones murinos: Importancia y perspectivas. II Congreso FESSACAL y IV Congreso de la Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL), September, Buenos Aires, Argentina.
  • Desarrollo de modelos murinos en la Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación. XV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias, September, Piriapolis, Uruguay.
  • Pautas para Fiscalizaciones 2015. III Encuentro Uruguayo de Comités de Ética en el Uso de Animales. December, Montevideo, Uruguay.

INTERNSHIPS & COURSES

    • 2015  Curso “Estrategias en bioseguridad y biocontención”. Barcelona, España.
    • 2015 Curso “Large animal genome engineering: transposons and genome editing”. Godollo, Hungría.
    • 2015 Entrenamiento “TNBS como inductor de colitis ulcerosa y análisis de fenotipos resultantes”. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos, Universidad  Nacional de La Plata, La Plata, Argentina.
    • 2014 Entrenamiento en imagenología in vivo de roedores. Instituto Leloir, Buenos Aires, Argentina.
    • 2014 Curso “Bioseguridad en el laboratorio”. Academia Nacional de Medicina, UBA, Buenos Aires, Argentina.
    • 2014 “Curso avanzado en bioseguridad y manejo de bioterios”. Universidad de los Andes y Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, Colombia.
    • 2014 “Curso de Bioseguridad para OGMs”. Instituto GENOK, Montevideo, Uruguay.
    • 2013 Curso “6th HKU-Pasteur Immunology Course-Innate Immunity and Inflammation“, Institut Pasteur, Hong Kong.
    • 2012 Entrenamiento en producción de ratas transgénicas mediante nucelasas Zinc Finger. Centre de Recherche en Transplantation et Immunologie, Institut National de la Santé Et de la Recherche Médicale, Nantes, Francia.
    • 2012 Entrenamiento en caracterización genómica de animales transgénicos utilizando Southern blot. INGEBI, Buenos Aires, Argentina
    • 2011 “3rd Latin American Course: ES cells as a model system for embryonic development”. Universidad Autónoma de México, Cuernavaca, México.
    • 2010 Entrenamiento en microinyección pronuclear de ADN, inyección de células madre embrionarias en blastocistos, y fertilización in vitro. Department of Experimental Medicine, Transgenesis laboratory, Charité Institut, Berlin, Alemania.
    • 2011 Entrenamiento en análisis por PCR en tiempo real de expresión de genes de C. elegans relacionados a la respuesta a Lactobacillus rhamnosus CNCM I3690. BIOPOLIS, S.L. Parc Cientific Universitat de Valencia, Valencia, España.

TEACHING

  • Course organization “Curso teórico-práctico de animales de laboratorio”, habilitante para la acreditación B-técnico experimentador- por la CNEA. April 2016.
  • Course and international symposium organization “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS“. September 2015.
  • Internal course organization IPMon from 2012 to 2015: “Manejo, técnicas de administración de sustancias y obtención de muestras en ratones, for scientists that works with mice at the Animal Facility.
  • Course organization along with Institut Pasteur Paris of the international course “Genetics of laboratory rodents”. December 2008 and 2011.
  • Several conferences dictated in national and international postgraduated courses

GRANTS

  1. “Ensayo de ingesta aguda de 4 cepas probióticas en ratones BALB/cJ”. Biópolis. Responsables Mariela Bollati, Martina Crispo (2014) USD 60.000.
  2. “Estudio de la actividad hipolipemiante, capacidad antioxidante y actividad anti-inflamatoria de los componentes del extracto de pericarpio derivado de girasol “violeta” (EPGv)”. Igra Semillas. Responsables Mariela Bollati, Carlos Battyhany, Martina Crispo (2013-2014) USD 38.500.
  3. RIIP International Course “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS”. Organizer. EUR 30.000.

PUBLICATIONS

  1. Crispo M, Schlapp G,Meikle MN, Mulet AP, Barrera N, Cuadro F, Dos Santos-Neto PC, Menchaca A.Advances in the Generation of Genetically Modified (GM) Animal Models: Meeting report. Transgenic Res. 2015 Dec;24(6):1087-90. doi: 10.1007/s11248-015-9913-5.
  2. Dos Santos Neto PC, Vilariño M,Barrera N, Cuadro F, Crispo M, Menchaca A. Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods. 2015 Feb;70(1):17-22. doi: 10.1016/j.cryobiol.2014.11.001
  3. Crispo M, Mulet AP, Tesson L, Barrera N, Cuadro F, dos Santos-Neto PC, Nguyen TH, Crénéguy A, Brusselle L, Anegón I, Menchaca A.Efficient Generation of Myostatin Knock-Out Sheep Using CRISPR/Cas9 Technology and Microinjection into Zygotes. PLoS One. 2015 Aug 25;10(8):e0136690. doi: 10.1371/journal.pone.0136690.
  4. Crispo M,Vilariño M, dos Santos-Neto PC, Núñez-Olivera R, Cuadro F, Barrera N, Mulet AP, Nguyen TH, Anegón I, Menchaca A. Embryo development, fetal growth and postnatal phenotype of eGFP lambs generated by lentiviral transgénesis. Transgenic research 2015 Feb;24(1):31-41. doi: 10.1007/s11248-014-9816-x.
  5. Schlapp G,Goyeneche L, Fernández G, Menchaca A, Crispo M. Administration of the nonsteroidal antiinflammatory drug tolfenamic acid at embryo transfer improves maintenance of pregnancy and embryo survival in recipient mice, Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 2015 Feb;32(2):271-5. doi: 10.1007/s10815-014-0378-x.
  6. Schlapp G, Meikle MN, Fernández G, Crispo M. Impaired pregnancy and birth rates in Swiss Webster mice used for embryo transfer. Transgenic Res (2016) 25: 553.
  7. Meikle MN, Schlapp G, Mulet AP, Capoano A, Geisinger A, Crispo M. CRISPRs system improves the overall efficiency in small transgenic facilities. Transgenic Res (2016) 25: 553.
  8. Meikle MN; Arévalo AP; Schlapp G; Fernández G., Crispo M.Environmental enrichment effects on reproductive performance of foster females used in transgenesis and rederivation techniques. Transgenic research 2014, 23; 897 – 897.
  9. Schlapp GMeikle MNCrispo M.Slow freezing versus vitrification of transgenic mouse embryos obtained by in vitro fertilization (IVF) intended for rederivation use. Transgenic research 2014, 23; 891 – 891.

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