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Animales Transgénicos y de Experimentación

MIEMBROS

  • Martina Crispo, DVM, PhD (Responsable)
  • Geraldine Schlapp, MSc (Técnico dedicación total)
  • María Noel Meikle, MSc (Técnico)
  • Ana Paula Arévalo, TMN (Técnico)
  • Gabriel Fernández, Biol (Técnico)
  • Ana Paula Mulet, MSc (Investigador asistente)
  • Sergio Ancheta (Cuidador de animales)
  • Gisell González (Cuidador de animales)
  • Natalia Quintana (Mantenimiento)
  • Pedro Dos Santos, DVM, MSc (Estudiante de Doctorado)
  • Federico Cuadro, DVM (Estudiante de Maestría) 

INSTALACIONES

  • Bioterio: área SPF (specific pathogen free) y Convencional
  • Laboratorio de Microinyección
  • Laboratorio de Técnicas de Reproducción Asistida (ART)
  • Laboratorio de Biología Molecular

SERVICIOS

  1. Generación de animales transgénicos empleando: tecnología CRISPR/Cas9, microinyección pronuclear de fragmentos de ADN, gene-targeting en células madre embrionarias, tecnología de Sleeping Beauty Transposons
  2. Criopreservación de embriones y esperma
  3. Rederivación de líneas murinas
  4. Fertilización in vitro de líneas murinas
  5. Cruzamientos y mantenimiento en condiciones SPF (libre de patógenos específicos) y convencionales de ratones de diversas cepas (C57BL/6J, BALB/cJ, DBA/2J, Nude, varios híbridos y aprox. 30 líneas transgénicas diferentes). Producción actual aproximada: 2000 ratones/mensuales.
  6. Ensayos de estudio de la capacidad inmunomoduladora de bacterias probióticas
  7. Ensayos de la actividad biológica de la eritropoyetina recombinante. Nuestro Bioterio está certificado por el Ministerio de Salud Pública.
  8. Ensayos de toxicidad para productos biotecnológicos (EPO, Filgen, Interferon).
  9. Producción de Anticuerpos policlonales en ratón

Formularios de solicitud de servicios

1) Solicitud de animales

2) Solicitud importación ratones transgénicos

3) Solicitud de edición génica en ratones mediante CRISPR/Cas9

4)  Solicitud de producción de ratones transgénicos por microinyección pronuclear

5) Solicitud de gene targeting en células madre embrionarias

6) Solicitud de producción de ratones quiméricos

7) Solicitud congelación y almacenamiento de esperma

8) Solicitud de criopreservación y almacenamiento de embriones

9) Solicitud descongelación y rederivación de embriones

10) Solicitud rederivación de embriones

11) Solicitud producción anticuerpos policlonales

Usuarios del bioterio IPMon

Formulario de registro de usuarios

CAPACITACIÓN

Ofrecemos entrenamiento en técnicas de producción de animales transgénicos y de reproducción asistida.

A su vez, ofrecemos capacitación en el manejo de patógenos BSL2 en procedimientos experimentales.

Para más información contactarse a uate@pasteur.edu.uy

INVESTIGACIÓN

En los últimos años nuestra Unidad obtuvo importantes logros a nivel científico, generando modelos genéticamente modificados en ratones y especies productivas con tecnologías de última generación como lentivirus y CRISPR/Cas9. Esto nos permite estar a la vanguardia mundial, posicionándonos como la única plataforma que ofrece este sistema a nivel nacional y de las pocas que ofrece a investigadores regionales. 

A partir de 2014, el área convencional del Bioterio ha ampliado su capacidad de alojamiento, incluyendo también modelos patógenos y ratas.

El fortalecimiento de las líneas de investigación propias de la Unidad y las colaboraciones existentes se han visto reflejadas en 10 artículos en revistas internacionales y varios resúmenes.

En el año 2015 se desarrolló un sistema para vitrificar embriones, en proceso de registro como modelo de utilidad para la criopreservación de los mismos.

Realizamos transferencia tecnológica permanente a compañías privadas de la región y Europa. Bajo la dirección de DMV Martina Crispo se formaron estudiantes en actividades desarrolladas en Uruguay y EEUU, Hungría, Escocia, Colombia y Argentina. 

En setiembre de 2015 organizamos el Simposio y Curso Internacional “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED ANIMAL MODELS”, con 60 inscriptos de la región y el mundo.

En suma, en estos últimos años hemos logrado posicionar a la Unidad en un alto nivel en el ámbito científico y tecnológico, lo que ha redundado también en la formación de RRHH.

Proyectos

  • 2012-2016 Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690. Tesis de Doctorado
  • 2014-2016 Evaluación por imagenología molecular del diabody anti-Tn en modelo murino de cáncer de pulmón. Tesis de Maestría.
  • 2014-2016 Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. Tesis de Maestría.
  • 2014- 2016 Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embriones in vitro.
  • 2012 – 2014 Criopreservación de embriones ovinos producidos in vitro en diferentes estadios mediante dos métodos de vitrificación. Tesis de Maestría.
  • 2013-2014 Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Beca de iniciación en la investigación.
  • 2013-2014 Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Beca de iniciación en la investigación.
  • 2011-2014 Una innovación tecnológica para la reproducción ovina en Uruguay: producción in vitro de embriones y su aplicación a gran escala.
  • 2012-2014 Applied environmental toxicology: risk evaluation to environmental antropogenic estrogen exposition in a transgenic murine model Oct4-GFP. Colaboración.
  • 2009-actualidad Trypanothione biosynthesis as a basis for drugs against trypanosomes. Colaboración.
  • 2008-actualidad Colon anticancer immunotherapy using Trypanosoma cruzi antigens. Colaboración.

EDUCACIÓN – CURSOS

FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS

  • Ana Paula Mulet, MSc – Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690. Tesis de Doctorado(2012-2016). UdelaR PRO.IN.BIO .
  • Pedro Claudino dos Santos Neto, DMV – Criopreservación de embriones ovinos. Tesis de Maestría(2011-2014), Facultad de Veterinaria – UDeLaR .
  • Natalibeth Barrera, Biol – Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embrionesin vitroTesis de Maestría.
  • Federico Cuadro, DVM – Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. Tesis de Maestría.
  • Tali Korytnicki, Biol – Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Beca de iniciación en la investigación (2013-2014), ANII.
  • Tali Korytnicki, Biol – Derivación de Células Madre Embrionarias (ESC) murinas como alternativa a su adquisición en otros laboratorios para uso en la producción de ratones genéticamente modificados. Tesis de grado(2012-2014).
  • Pia Jacques, estudiante – Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Beca de iniciación en la investigación(2013-2014), ANII.
  • Pia Jacques, estudiante – Obtención de herramientas moleculares para el estudio del estado redox de tripanosomátidos. Tesis de grado(2012-2014).
  • Fabricio Maschi, DVM – Tecnologías embrionarias murinas. Pasantía.

CONGRESOS

  • XIII International Society for Transgenic Technologies Meeting- Prague, Czech Republic. 2016. Presentación de Posters: “CRISPRs system improves the overall efficiency in small transgenic facilities, Impaired pregnancy and birth rates in Swiss Webster mice used for embryo transfer“.
  • XII International Society for Transgenic Technologies Meeting -Edinburgh, UK. 2014. Presentación de Posters: “Slow freezing versus vitrification of transgenic mouse embryos obtained by in vitro fertilization (IVF) intended for rederivation use“, “Environmental enrichment effects on reproductive performance of foster females used in transgenesis and rederivation techniques“.
  • II Congreso FESSACAL y IV Congreso de la Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL), Buenos Aires, Argentina, 2014. Presentación de poster: “Eficiencia de la técnica de fertilización in vitro (FIV) mediante esperma congelado en murinos”. 
  • XV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias, September, Piriapolis, Uruguay, 2014. Presentación oral y poster: “Desarrollo de modelos murinos en la Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación (UATE)
  • XII Congresso da Sociedade Brasileira de Ciência em Animais de Laboratório (SBCAL), Foz do Iguaçu, Brasil, 2012. Presentación de poster. “Eficiencia de técnicas de transgénesis en el Institut Pasteur de Montevideo“.
  • IX International Society for Transgenic Technologies Meeting, Berlin, Germany,  2010. Presentación oral. “Running a transgenic mice facility in Uruguay, South America. A fulfilled challenge“.

PRESENTACIONES ORALES EN CONGRESOS NACIONALES E INTERNACIONALES

  • Banco de esperma y embriones murinos: Importancia y perspectivas. II Congreso FESSACAL y IV Congreso de la Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL), Setiembre 2014, Buenos Aires, Argentina.
  • Desarrollo de modelos murinos en la Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación. XV Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias, Setiembre, Piriápolis, Uruguay.
  • Pautas para Fiscalizaciones 2015. III Encuentro Uruguayo de Comités de Ética en el Uso de Animales. Diciembre, Montevideo, Uruguay.

PASANTÍAS & CURSOS

  • 2015  Curso “Estrategias en bioseguridad y biocontención”. Barcelona, España.
  • 2015 Curso “Large animal genome engineering: transposons and genome editing”. Godollo, Hungría.
  • 2015 Entrenamiento “TNBS como inductor de colitis ulcerosa y análisis de fenotipos resultantes”. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos, Universidad  Nacional de La Plata, La Plata, Argentina.
  • 2014 Entrenamiento en imagenología in vivo de roedores. Instituto Leloir, Buenos Aires, Argentina.
  • 2014 Curso “Bioseguridad en el laboratorio”. Academia Nacional de Medicina, UBA, Buenos Aires, Argentina.
  • 2014 “Curso avanzado en bioseguridad y manejo de bioterios”. Universidad de los Andes y Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, Colombia.
  • 2014 “Curso de Bioseguridad para OGMs”. Instituto GENOK, Montevideo, Uruguay.
  • 2013 Curso “6th HKU-Pasteur Immunology Course-Innate Immunity and Inflammation“, Institut Pasteur, Hong Kong.
  • 2012 Entrenamiento en producción de ratas transgénicas mediante nucelasas Zinc Finger. Centre de Recherche en Transplantation et Immunologie, Institut National de la Santé Et de la Recherche Médicale, Nantes, Francia.
  • 2012 Entrenamiento en caracterización genómica de animales transgénicos utilizando Southern blot. INGEBI, Buenos Aires, Argentina
  • 2011 “3rd Latin American Course: ES cells as a model system for embryonic development”. Universidad Autónoma de México, Cuernavaca, México.
  • 2010 Entrenamiento en microinyección pronuclear de ADN, inyección de células madre embrionarias en blastocistos, y fertilización in vitro. Department of Experimental Medicine, Transgenesis laboratory, Charité Institut, Berlin, Alemania.
  • 2011 Entrenamiento en análisis por PCR en tiempo real de expresión de genes de C. elegans relacionados a la respuesta a Lactobacillus rhamnosus CNCM I3690. BIOPOLIS, S.L. Parc Cientific Universitat de Valencia, Valencia, España.

DOCENCIA

  • Organización del curso “Curso teórico-práctico de animales de laboratorio”, habilitante para la acreditación B-técnico experimentador- por la CNEA. Realizado del 4 al 12 de abril de 2016.
  • Organización del curso y simposio internacional “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS“. Setiembre 2015.
  • Organización del curso interno al IPMon desde 2012 a 2015: Manejo, técnicas de administración de sustancias y obtención de muestras en ratones, para 20 investigadores que emplean ratones en el Bioterio.
  • Organización conjunta con la Unidad de Genética Funcional del Institut Pasteur de Paris del curso internacional “Genetics of laboratory rodents”. Realizado en diciembre 2008 y 2011.
  • Varias conferencias en cursos de postgrado a nivel nacional y regional.

FINANCIACIÓN

SUBSIDIOS

  1. Ensayo de ingesta aguda de 4 cepas probióticas en ratones BALB/cJ”. Biópolis. Responsables Mariela Bollati, Martina Crispo (2014) USD 60.000.
  2. “Estudio de la actividad hipolipemiante, capacidad antioxidante y actividad anti-inflamatoria de los componentes del extracto de pericarpio derivado de girasol “violeta” (EPGv)”. Igra Semillas. Responsables Mariela Bollati, Carlos Battyhany, Martina Crispo (2013-2014) USD 38.500.
  3. RIIP International Course “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS”. EUR 30.000.

PUBLICACIONES

  1. Crispo M, Schlapp G,Meikle MN, Mulet AP, Barrera N, Cuadro F, Dos Santos-Neto PC, Menchaca A.Advances in the Generation of Genetically Modified (GM) Animal Models: Meeting report. Transgenic Res. 2015 Dec;24(6):1087-90. doi: 10.1007/s11248-015-9913-5.
  2. Dos Santos Neto PC, Vilariño M,Barrera N, Cuadro F, Crispo M, Menchaca A. Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods. 2015 Feb;70(1):17-22. doi: 10.1016/j.cryobiol.2014.11.001
  3. Crispo M, Mulet AP, Tesson L, Barrera N, Cuadro F, dos Santos-Neto PC, Nguyen TH, Crénéguy A, Brusselle L, Anegón I, Menchaca A.Efficient Generation of Myostatin Knock-Out Sheep Using CRISPR/Cas9 Technology and Microinjection into Zygotes. PLoS One. 2015 Aug 25;10(8):e0136690. doi: 10.1371/journal.pone.0136690.
  4. Crispo M,Vilariño M, dos Santos-Neto PC, Núñez-Olivera R, Cuadro F, Barrera N, Mulet AP, Nguyen TH, Anegón I, Menchaca A. Embryo development, fetal growth and postnatal phenotype of eGFP lambs generated by lentiviral transgénesis. Transgenic research 2015 Feb;24(1):31-41. doi: 10.1007/s11248-014-9816-x.
  5. Schlapp G,Goyeneche L, Fernández G, Menchaca A, Crispo M. Administration of the nonsteroidal antiinflammatory drug tolfenamic acid at embryo transfer improves maintenance of pregnancy and embryo survival in recipient mice, Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 2015 Feb;32(2):271-5. doi: 10.1007/s10815-014-0378-x.
  6. Schlapp G, Meikle MN, Fernández G, Crispo M. Impaired pregnancy and birth rates in Swiss Webster mice used for embryo transfer. Transgenic Res (2016) 25: 553.
  7. Meikle MN, Schlapp G, Mulet AP, Capoano A, Geisinger A, Crispo M. CRISPRs system improves the overall efficiency in small transgenic facilities. Transgenic Res (2016) 25: 553.
  8. Meikle MN; Arévalo AP; Schlapp G; Fernández G., Crispo M.Environmental enrichment effects on reproductive performance of foster females used in transgenesis and rederivation techniques. Transgenic research 2014, 23; 897 – 897.
  9. Schlapp GMeikle MNCrispo M.Slow freezing versus vitrification of transgenic mouse embryos obtained by in vitro fertilization (IVF) intended for rederivation use. Transgenic research 2014, 23; 891 – 891.

 

CONTACTO

uate@pasteur.edu.uy