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Proteínas Recombinantes

MIEMBROS

  • Pablo Oppezzo, PhD (Responsable)
  • Agustín Correa, PhD
  • Claudia Ortega, PhD
  • Cecilia Abreu, PhD

EQUIPOS PRINCIPALES

ÄKTAxpress

ÄKTAxpress para la purificación de proteínas ofrece la mayor pureza posible necesaria para estudios funcionales y estructurales. Los protocolos optimizados con la posibilidad de incluir hasta cuatro pasos de purificación minimizan la necesidad de experiencia en cromatografía. Los procedimientos de remoción y mantenimiento de tags pueden integrarse a los protocolos de purificación, eliminando la interferencia manual durante la corrida.

También pueden realizarse en este equipo esquemas de purificación para proteínas con doble tag de afinidad. Un protocolo de cuatro pasos puede consistir en una cromatografía de afinidad (AC), desalinización (DS), cromatografía de intercambio iónico (IEX) y gel filtración (GF).
ÄKTAxpress™ es un sistema de cromatografía dedicado a la purificación de múltiples pasos de proteínas y anticuerpos con tags de afinidad. Cada módulo ÄKTAxpress consiste en una bomba sistémica de muestra (0.5 – 6.5 ml/min), un sensor de aire para la completa aplicación de la muestra, un monitor UV (280 o 254 nm), y un colector de fracciones en microplaca de 96 o 24 pocillos. Todos los componentes se encuentran bajo el control de una versión especialmente diseñada del software de control UNICORN. El sistema también admite la instalación de lectores de códigos de barras para una mayor automatización del proceso.

ÄKTA Pure

ÄKTA™ pure es un sistema de cromatografía flexible e intuitivo para la purificación rápida de proteínas, péptidos y ácidos nucleicos desde niveles del orden de los microgramos a gramos de la proteína de interés. El dispositivo ha sido diseñado para usarse fácilmente con un software que no requiere de conocimientos de programación, sino que se basa en una interfaz de arrastrar y soltar.  El diseño modular permite que se integren diferentes tipos de bombas, válvulas y otros equipos cuando sea necesario. ÄKTA pure elimina la necesidad de conocimientos de programación para controlar la ejecución de la cromatografía, con la adición de plantillas de métodos simples de arrastrar y soltar en el software de control UNICORN™ 6. A través del software también es posible rastrear electrónicamente el uso de, y los datos obtenidos de, columnas individuales, lo cual es particularmente útil ya que los sistemas de cromatografía se colocan a menudo en instalaciones compartidas.

ÄKTA Purifier

Los sistemas de purificación ÄKTA™purifier están diseñados para separar y caracterizar proteínas de manera rápida, con una alta resolución y a gran escala. Los sistemas llevan a cabo todas las técnicas cromatográficas y buscan las mejores condiciones de unión y elución, pH, formas de gradientes y tasas de flujo. Este sistema puede producir 25 MPa y flujos de hasta 10 ml/min, lo cual lo hace ideal para la purificación a nivel de laboratorio y para análisis de alta resolución.

Robot Tecan Genesis 200

El Tecan Génesis 200 es un robot versátil para la automatización de las tareas de pipeteo. Está equipado con dos brazos, el manipulador de líquidos (LiHa liquid handler) y el robot manipulador (RoMa robot manipulator). El LiHa es un brazo de pipeteo de 8 canales con detección de conductividad en grado de descargar volúmenes de 5-1000 ul. RoMa es un brazo manipulador capaz de tomar y mover objetos en la estación de trabajo.

Fermentador BIOSTAT® B  plus (Procariota)

El fermentador | biorreactor BIOSTAT® B plus cubre una amplia variedad de requerimientos en la investigación y el desarrollo biotecnológico y biofarmacéutico. Es un  sistema para la utilización de fermentación microbiana y fácilmente autoclavable. Sus características más importantes son:

  • Regulación de temperatura mediante manta térmica y dedo frío de acero inoxidable (recipientes de cultivo de vidrio de pared simple)
  • Ajuste del pH añadiendo ácido y base o de CO2 y base
  • Control de la espuma mediante adición de agentes antiespumantes o por medio de eliminadores mecánicos de espuma (disco anti espuma)
  • Adición de sustratos con ayuda de una bomba o de un controlador gravimétrico
  • Supervisión del nivel mediante sensor o controlador gravimétrico
  • AIRE, conexiones de O2, N2 y CO2
  • Volumen máximo de trabajo 5 litros

Biorreactor de sobremesa CelliGen310  (Eucariota) 

CelliGen® 310 es un biorreactor de sobremesa autoclavable y validable con control avanzado y pantalla táctil. Se dispone de un amplio rango de configuraciones para elegir cultivos celulares animales, vegetales y de insectos Las características principales son:

  • El sofisticado software RPC (reactor controlado por procesador) controla hasta 32 parámetros de proceso, calcula las tendencias de hasta 8 bucles y proporciona funciones de seguridad integradas
  • Control integrado de hasta 8 gases para burbujeo y revestimiento de gas, disponible en configuraciones TMFC de alto y bajo flujo
  • Los sistemas incluyen 3 bombas integradas; motor de accionamiento magnético; control de temperatura, pH y DO; mezcla de 3 ó 4 gases; 7 conexiones de entrada/salida analógicas
  • Tubos de vidrio intercambiables y autoclavables disponibles en cuatro tamaños: 2,5, 5,0, 7,5 y 14,0 litros, volumen total.
  • Los tubos están disponibles en configuraciones de doble pared (camisa de agua) o una pared (manta de calor)
  • Capaz de controlar hasta cuatro reactores simultáneamente desde una sola estación de control maestra

Biorreactor BelloCell 3000

El sistema de cultivo para células eucariotas BelloCell 3000 provee un ambiente protegido, controlado y contenido para el crecimiento de cultivos celulares. Su capacidad máxima es equivalente a enormes rendimientos – promediando 2.4×1010 células para un sistema de cuatro botellas. El BelloCell 3000 consiste en tres componentes principales; una caja control, la unidad BelloStage, y botellas desechables de 500 ml listas para usar. La unidad BelloStage, con capacidad para hasta cuatro botellas de cultivo, mueve el contenido de las botellas de arriba a abajo de acuerdo al programa elegido, utilizando una plataforma para comprimir y expandir los fuelles incluidos en las botellas, para optimizar la oxigenación. A medida que la plataforma se eleva, comprime los fuelles, forzando al medio a entrar a la cámara que contiene los discos  BioNOC II®; a medida que la plataforma desciende, el medio retorna a los fuelles en expansión, exponiendo los discos al ambiente atmosférico. Las células dentro de estos discos crecen a lo largo de las fibras, y luego se apilan para rellenar el espacio en la red.

EmulsiFlex-C5 homogenizador

EmulsiFlex-C5 es un homogenizador con una bomba de presión de aire / gas. El funcionamiento silencioso es debido a una válvula piloto de motor de la bomba especialmente diseñada. El estándar EmulsiFlex-C5 se suministra con una válvula de homogeneización controlada neumáticamente El EmulsiFlex-C5 tiene una capacidad de 1-5L/hr. Una muestra de 7 ml se puede procesar con un volumen de retención de vuelta de menos de 1 ml. La presión de homogeneización se puede ajustar en el rango de 3.5-207MPa.

Multitron 2 Incubador de Agitacion Orbital

El Multitron II es un incubador agitador de gran capacidad que combina flexibilidad y seguridad operacional con la más óptima utilización de espacio por su construcción modular. El laboratorio UPR tiene tres unidades con una capacidad de cultivo de 5 litros cada una para diferentes cultivos procariotas. Además, un microprocesador integral ofrece una amplia variedad de posibilidades de control, incluyendo rangos de alta temperatura (12ºC a 65ºC), control de oxigenación e intensidad de luz.
services

SERVICIOS

Servicios que ofrecemos actualmente

1.Expresión de proteínas en sistemas procariotas y eucariotas:

  • Sistema Baculovirus
  • Expresión en células de Mamífero
  • Sistema  de expresión en Drosophila

2.Sistema de solubilización manual que permite probar 74 condiciones de cultivos diferentes para optimizar la expresión proteica.

3.Sistemas de purificación manual y robótico

INVESTIGACIÓN

 

FINANCIACIÓN

  1. Fondo María Viña – Dr. Pablo Oppezzo – “Development of Artificial Binding Proteins (Affitins) to evaluate new prognosis and treatment strategies in Chronic Lymphocytic Leukemia”– 2015-2017 – ANII
  2. Fondo Clemente Estable – Dra. Cecilia Abreu – “Estudios genómicos del perfil de metilación del ADN en una población tumoral leucémica sobre-expresando la enzima AID” – 2013-2014 – ANII
  3. Fondo Clemente Estable – Dr. Pablo Oppezzo – “Implicancias de la expresión anómala de la enzima mutagénica AID en los procesos leucémicos: Desarrollo de un modelo tumoral” – 2013-2015 – ANII
  4. Fondo María Viñas – Dr. Pablo Oppezzo – “Expresión de la Lipoproteína Lipasa en las células B de la Leucemia Linfoide Crónica (LLC): Hacia el desarrollo de un nuevo marcador pronóstico” – 2013-2015 – ANII
  5. Fondo CYTED – Dr. Pablo Oppezzo – “Red-iberoamericana de Leucemia Linfoide Crónica: hacia el desarrollo de nuevos marcadores pronósticos” – 2011-2014 – CYTED.
  6. Proyectos Transversales IPMont – Dr. Pablo Oppezzo –. “Genomic landscape of the methylation pattern and the microRNAs/mRNAs expression in progressive patients with Chronic Lymphocytic Leukemia” – 2013-2014 – Institut Pasteur de Montevideo.
  7. Fondo Lady Tata – Dr. Pablo Oppezzo – “Characterisation of the proliferating pool in CLL.  Is AID expression a marker of this subpopulation?” – 2008-2011

 

EDUCACIÓN – CURSOS

  1. Curso de postgrado: “Introducción al análisis estructural y funcional de proteínas”, Coordinadores: Agustin Correa,Horacio Botti,Matias Machado,Felipe Trajtenberg,Lucia Turell, Bruno Manta . Institut Pasteur de Montevideo. Setiembre-Novimbre 2014.
  2. Curso de postrado: “Expression, Purification and Crystallization of Recombinant Proteins by High-throughput Methodologies”. Coordinadores: Pablo Oppezzo y Renaud Vincentelli. Febrero 2013.
  3. Curso de postgrado: “Expresión de Proteínas Recombinantes”. PEDECIBA- Biología- Maestría en Biotecnología, Facultad de Ciencias – Institut Pasteur de Montevideo.  Coordinadores: Oppezzo P. (IP Montevideo) y Marín M. (FC, UdelaR) – 5 de noviembre – 10 de diciembre de 2008.

 

PUBLICACIONES

  1. Correa A, Oppezzo P. Overcoming the solubility problem in E. coli: available approaches for recombinant protein production. Methods Mol Biol. 2015;1258:27-44. doi: 10.1007/978-1-4939-2205-5_2. Review.
  2. Correa A, Ortega C, Obal G, Alzari P, Vincentelli R, Oppezzo P. Generation of a vector suite for protein solubility screening. Front Microbiol. 2014 Feb 25. eCollection 2014.
  3. Alem, D.; Diaz, P.; Leoni, C.; De Simone, S.G.; Correa, A.; Oppezzo, P.; Dalla Rizza, M. In Search of Topical Agricultural Biofungicides: Properties of the Recombinant Antimicrobial Peptide TrxAq-AMP obtained from Amaranthus quitensis. Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2014, v. 6, no.5, p. 268-273.
  4. Correa A, Pacheco S, Mechaly AE, Obal G, Béhar G, Mouratou B, Oppezzo P, Alzari PM, Pecorari F. Potent and specific inhibition of glycosidases by small artificial binding proteins (affitins). PLoS One. 2014 May 13;9(5) eCollection 2014.
  5. Correa A, Trajtenberg F, Obal G, Pritsch O, Dighiero G, Oppezzo P, Buschiazzo A. Structure of a human IgA1 Fab fragment at 1.55 A resolution: potential effect of the constant domains on antigen-affinity modulation. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 2013 Mar;69(Pt 3):388-97. doi: 10.1107/S0907444912048664.
  6. Oppezzo P, Obal G, Baraibar MA, Pritsch O, Alzari PM, Buschiazzo A. Crystal structure of an enzymatically inactive trans-sialidase-like lectin from Trypanosoma cruzi: the carbohydrate binding mechanism involves residual sialidase. Biochim Biophys Acta. 2011 Sep; 1814(9):1154-61. doi:10.1016/j.bbapap.2011.04.012.
  7. Correa A, Oppezzo P. Tuning different expression parameters to achieve soluble recombinant proteins in E. coli: advantages of high-throughput screening. Biotechnol J. 2011 Jun;6(6):715-30. doi: 10.1002/biot.201100025. Review.
  8. Moratorio G, Obal G, Dubra A, Correa A, Bianchi S, Buschiazzo A, Cristina J, Pritsch O. Phylogenetic analysis of bovine leukemia viruses isolated in South America reveals diversification in seven distinct genotypes. Arch Virol. 2010 Apr;155(4):481-9. doi: 10.1007/s00705-010-0606-3.


CONTACTO

Dr. Pablo Oppezzo

e-mail:poppezzo@pasteur.edu.uy