Líneas de investigación

Desarrollo del campo de fuerzas de grano grueso SIRAH (Southamerican Initiative for a Rapid and Accurate Hamiltonian).
Nuestro grupo desarrolla y mantiene uno de los más amplios campos de fuerza de grano grueso para simulaciones biomoleculares existente en la actualidad. SIRAH (www.sirahff.com) usa una aproximación de tipo Top Down y un Hamiltoniano clásico, común a los campos de fuerza atómicos. SIRAH es distribuido libremente con herramientas de análisis de fácil utilización, parámetros y topologías para simular ADN, proteínas, solvente explícito y fosfolípidos. Actualmente se encuentran en desarrollo representaciones para iones metálicos, glicanos y RNA. Esta línea es enteramente desarrollada por nuestro grupo.

Desarrollo de sensores FRET para vías de señalización de nucleótidos cíclicos y redox.
Mediante el uso de bioinformática y modelización estructural, conjuntamente con simulaciones de grano grueso hemos desarrollado una nueva generación de sensores FRET para señalización de AMPc, GMPc y condiciones redox. Estos biosensores permiten alcanzar una resolución espacial sin precedentes ya que pueden ser genéticamente fundidos al C-terminal de virtualmente cualquier proteína, direccionándolos a cualquier compartimiento celular. Esta línea de desarrollo continúa con el diseño de nuevas generaciones de biosensores en el marco del programa ProTeMCA y en colaboración con grupos experimentales extranjeros.

Estudios de la estabilidad de Flavivirus.
Utilizando simulaciones multiescala estudiamos los distintos factores que afectan la estabilidad de partículas virales (Virus-like Particles). El costo computacional reducido de nuestro esquema computacional permite realizar simulaciones comparativas de distintos flavivirus variando las condiciones de temperatura y pH. La disponibilidad de estructuras experimentales de partículas virales de Zika, Dengue, encefalitis Japonesa (JEV) y virus de la Encefalitis transmitida por garrapatas (TBEV) nos permite estudiar la accesibilidad de distintos epítopes, contribuyendo a entender los mecanismos de neutralización viral por anticuerpos. Adicionalmente, el enfoque computacional permite identificar aminoácidos implicados en el mecanismo de disparo ácido de los flavivirus, lo que podría contribuir notablemente al desarrollo de vacunas mediante la creación de virus atenuados. Estos estudios forman parte de colaboraciones con grupos experimentales nacionales y extranjeros.

Líneas de investigación

Una nueva isoforma de DBC1 regulada por el estado del ciclo celular y su función en la función hepática.
Durante la búsqueda de nuevas vías que regulan la función DBC1 encontramos una nueva forma de DBC1 que carece del dominio N-terminal (que demostró que se une a la mayoría de los interactores, incluido SIRT1), a la que llamamos DN-DBC1. Esta forma de DBC1 es el resultado del procesamiento proteolítico parcial de la proteína, y solo está presente cuando las células ingresan en la fase G0 del ciclo celular y desaparece tan pronto como la célula vuelve a entrar en el ciclo celular. Es importante destacar que, cuando las células se ven obligadas a detener el ciclo celular en diferentes puntos de control (G1/S, G2/M), esta forma corta de DBC1 no está presente. Recientemente, hemos encontrado que las transiciones entre ambas formas de la proteína están estrechamente relacionadas con la capacidad regenerativa del hígado. Este es un proceso de especial relevancia médica, particularmente en situaciones de daño hepático agudo o transplante.

Folistatin-like 1 (FSTL1): una glicoproteína de secreción y posible regulador de enfermedades metabólicas.
En la búsqueda de factores secretados regulados por DBC1 y podrían explicar el fenotipo de “obesidad saludable” regulado por esta proteína, observamos que FTSL-1, una glicoproteína de secreción es regulada por DBC1 y SIRT1, tanto in vitro como en animales y pacientes.
FSTL-1 es una glucoproteína que se ha relacionado recientemente con la regeneración cardíaca durante el infarto, la protección renal y la inflamación. Nuestros resultados muestran que FSTL1 está regulado por DBC1 in vitro e in vivo. Además, encontramos que la expresión de FSTL1 está regulada en el tejido graso durante la obesidad y que FSTL1 juega un papel durante la diferenciación de los adipocitos. Es importante destacar que encontramos que esta regulación también ocurre en pacientes obesos. Actualmente estamos trabajando para comprender la relevancia de FSTL1 en la función del tejido adiposo in vivo. Estamos generando ratones FSTL1 KO específicos para tejidos y también expandiendo nuestros hallazgos preliminares en pacientes.

SIRT6: una sirtuina con funciones no clásicas en el control de la respuesta inflamatoria.
Una de las características comunes de las enfermedades crónicas no transmisibles, incluyendo obesidad, diabetes tipo II y enfermedaes cardiovasculares, es la presencia de inflamación sistémica crónica. De hecho, existen muchas evidencias que apoyan la hipótesis de que esta inflamación a bajo nivel, pero persistente en el tiempo es una de las principales causas en la progresión de estas patologías. Las sirtuinas, de las cuales hay siete miembros en los mamíferos, parecen antagonizar este estado pro-inflamatorio y han sido extensamente estudiadas en este sentido. Sin embargo, trabajos recientes muestran que SIRT6 puede, en determindas circunstancias, pivotear entre funciones anti y pro-inflamatorias. Nuestro laboratorio se encuentra trabajando en intentar comprender cómo ocurren estos cambios de función en SIRT6 y cómo esto puede afectar la respuesta inflamatoria aguda y crónica.

Modelos animales para investigación biomédica en enfermedades metabólicas.
Hemos realizado un gran esfuerzo para establecer una batería de modelos animales adecuados para la investigación biomédica en enfermedades metabólicas. Muchos de estos modelos, junto con nuestra experiencia, hicieron posible no solo desarrollar nuestros proyectos de investigación, sino también establecer fructíferas colaboraciones internas y externas. También ayudó a las empresas privadas a interesarse por nuestras capacidades y a generar nuevas oportunidades de financiación. Entre modelos animales ya disponibles en nuestro laboratorio se destacan algunos para la obesidad inducida por la dieta y la resistencia a la insulina; la aterosclerosis (ApoE -/- y LDLR -/-ApoB100/100only), la hipertensión arterial (infusión de AngII), la enfermedad renal crónica (Nefrectomía + AngII – en desarrollo), y ratones genéticamente modificados para diferentes marcados ( DBC1 – / -, BBS4 – / -, CD38 – / -, FSTL1 loxp / loxp, SIRT6loxp / loxp).

Líneas de investigación

Señalización y regulación en microorganismos
Entre las proteínas de mayor interés se encuentran las que conforman “sistemas de dos componentes” (TCS) en bacterias. Los TCSs son centrales en mediar señalización y regulación. También se estudian otras proteínas reguladoras, aun sin ser miembros de TCSs. La pregunta central detrás de esta línea es ¿cómo usan las células estas proteínas para detectar señales extra- e intra-celulares, regulando luego funciones específicas? Para responder, se investigan bacterias saprófitas (como Bacillus subtilis, Leptospira biflexa), así como también especies patógenas (Leptospira interrogans, L. borgpetersenii, L. noguchii, Enterococcus faecium). En dichos modelos se estudian varios procesos biológicos claves, como la regulación de síntesis de lípidos (Albanesi et al., Proc Natl Acad Sci USA 2009, 106:16185; Trajtenberg et al., J Biol Chem 2010, 285:24892; Trajtenberg et al., mBio 2014, 5:e02105; Trajtenberg et al., eLife 2016, 5:e21422; Imelio et al., Bio-protocol 2017, 7:e2510), del metabolismo de hemo (Morero et al., Mol Microbiol 2014, 94:340), o bien de la virulencia en patogenicidad (Adhikarla et al., Front Cell Infect Microbiol 2018, 8:45).

Biología molecular y estructural de Leptospira
Distintas especies de Leptospira causan leptospirosis. Esta zoonosis es la más extendida en el mundo, reemergiendo como un problema de salud humana y animal importante. En Uruguay es un problema veterinario significativo. El LMME quiere dilucidar mecanismos moleculares que determinan y/o regulan la virulencia y patogenicidad de estas bacterias. Actualmente hay dos focos de atención: el estudio del aparato locomotor, y la tipificación de especies autóctonas en Uruguay.

i- Aparato locomotor de Leptospira. La activa movilidad de las leptospiras (natación), es fundamental para la virulencia de las especies patógenas que provocan leptospirosis. La organela esencial para la natación es el flagelo. El LMME está estudiando en gran profundidad la arquitectura molecular del flagelo de Leptospira. El filamento de estos flagelos es de ubicación periplasmática, una característica única de las Espiroquetas, incluyendo parientes de Leptospira, como Treponema pallidum (causal de sífilis) o Borrelia burgdorferi (provoca la enfermedad de Lyme). Nuestro laboratorio, en colaboración con los grupos de Albert Ko y Charles Sindelar (Yale Univ) y Mathieu Picardeau (Inst Pasteur), ha demostrado que el filamento del flagelo de leptospiras es mucho más complejo que los flagelos de modelos bacterianos más conocidos, usados hasta hoy como paradigma del movimiento de natación en bacterias. Por ejemplo, Salmonella y otras enterobacterias, tienen filamentos con una única especie de proteína (flagelina), miestras que Leptospira tiene al menos ocho diferentes (Wunder et al., Mol Microbiol 2016, 101: 457; San Martin et al., Acta Crystallogr F 2017, 73:123; Wunder et al., Front Cell Infect Microbiol 2018, 8:130). Recientemente hemos cristalizado dos de las proteínas nuevas, a partir de leptospiras patógenas y saprófitas (San Martín et al., Acta Crystallogr F 2017, 73:123), hemos resuelto sus estructuras 3D (resultados no publicados) revelando plegamientos absolutamente novedosos, y estamos ahora avanzando en el descubrimiento de sus interactores fisiológicos para llevar adelante sus roles en el ensamblaje flagelar.

ii- Aislamiento y tipificación de cepas nativas de Leptospira. Esta línea, desarrollada en el contexto de un proyecto multicéntrico colaborativo, tiene como objetivo aislar cepas autóctonas de la bacteria Leptospira a partir de muestras biológicas obtenidas de bovinos infectados, y de otros reservorios animales. Dichos aislamientos se tipifican con técnicas complementarias: métodos serológicos, y también enfoques moleculares más novedosos en el país, logrando en definitiva mayores sensibilidad y especificidad (Zarantonelli et al., PLoS Negl Trop Dis 2018, 12: e0006694). Este esfuerzo ha llevado a la creación de un biobanco de cepas de Leptospira, que hasta ahora no estaba disponible en el dominio público en Uruguay, informando la identidad de los serotipos en circulación. Este cepario será útil en la formulación de vacunas con mayor eficacia, en el mejoramiento de métodos diagnósticos, así como también en investigaciones ulteriores sobre la leptospirosis en Uruguay.

Trabajos colaborativos
El laboratorio colabora con el Dr. Hugo Gramajo (Instituto de Biología Molecular y Celular IBR, Rosario, Argentina) y su equipo, con el objetivo de dilucidar las estructuras cristalinas de los factores de transcripción de Mycobacterium tuberculosis, que participan en la regulación del metabolismo de los lípidos.
También colabora con el Dr. Mathieu Picardeau (Instituto Pasteur, París, Francia) y el Dr. Albert Ko (Universidad de Yale, New Haven, EE. UU.) en la motilidad de Leptospira y los mecanismos moleculares de la patogénesis de estas bacterias.
Asimismo, el laboratorio integra un consorcio multicéntrico en Uruguay, trabajando con equipos del Ministerio de Ganadería, Agricultura y Pesca (Alejandra Suanes, Rodolfo Rivero, DILAVE, MGAP), el Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria (Franklin Riet, INIA), el Departamento de Bacteriología de la Facultad de Medicina (Felipe Schelotto, Instituto de Higiene, Udelar) abordando los problemas del aislamiento, tipificado, diagnóstico y desarrollo de vacunas de Leptospira veterinaria.

Líneas de investigación

Caracterizar los orígenes del microambiente inmunológico en la progresión tumoral y su correlación con la expresión constitutiva de AID en pacientes progresores con LLC. El objetivo es corroborar si la expresión constitutiva de AID durante la evolución de la enfermedad es un evento clave en la progresión de la LLC.

Descifrar el efecto de nuevos inhibidores de quinasas y moléculas proapoptóticas sobre las subpoblaciones proliferativas de LLC. Tiene como fin caracterizar los efectos moleculares y fenotípicos de los nuevos inhibidores de quinasas y la acción de moléculas proapoptóticas en subpoblaciones proliferantes del clon tumoral durante el tratamiento.

La proteína S100A9 como nuevo blanco terapéutico en la LLC. Vinculación de la inflamación, el microambiente y la evolución clínica. Busca profundizar en el conocimiento sobre el papel de la inflamación en la evolución clínica de los pacientes con LLC.

Desarrollar una plataforma de proteínas de unión artificial (ABP) para generar nuevas herramientas de pronóstico y tratamiento en la LLC. Su objetivo es crear una herramienta terapéutica (ABP) capaz de, simultáneamente, reconocer a la célula tumoral y reclutar a células asesinas naturales (NK) para que sea destruido el clon tumoral.

Líneas de investigación

Estudio de la interacción hospedero-patógeno intracelular con enfoque sistémico.
En la UBM estudiamos factores de virulencia de patógenos intracelulares, así como las vías y genes del hospedero necesarios para el establecimiento de la infección, y la interfase entre ambas. Nos planteamos como objetivos principales el diseño, a partir de estos hallazgos, de nuevas estrategias de tratamiento o prevención de diversas patologías infecciosas, entre las cuales se destacan la Enfermedad de Chagas, tripanosomiasis africanas, leishmaniasis, y tuberculosis.

Determinación de factores de virulencia necesarios para la infección con T.cruzi.
Para el establecimiento y persistencia de la infección de T. cruzi, hemos descrito un conjunto de proteínas relacionadas con el metabolismo redox de tripanosomátidos (triparedoxina peroxidasa citosólica y mitocondrial, triparredoxinas, glutarredoxinas, pteridín reductasa), caracterizándolas desde el punto de vista estructural y funcional. Nos encontramos desarrollando estrategias para su inhibición, así como su aplicación en el desarrollo de estrategias terapéuticas y preventivas.

Caracterización de los cambios en la expresión génica que producen parásitos intracelulares en células humanas.
Hemos demostrado que existe una reprogramación celular por parte de T. cruzi que permite el establecimiento y persistencia de la infección en células humanas. Uno de los principales objetivos que perseguimos actualmente es el de identificar proteínas del hospedero, que al ser inhibidas, impiden la infección por T. cruzi. Estamos también, extendiendo esta estrategia para estudios genómicos y de biología molecular en leishmaniosis, tripanosomiasis africana, neosporosis y tuberculosis.

Líneas de investigación

Caracterización biofísica y estructural de la proteína de cápside de VLB (CA-VLB).
El mecanismo de formación de la cápside de VLB a través del autoensamblaje de miles de copias de CA-VLB representa un evento clave en el ciclo de este retrovirus. Para comprender este mecanismo hemos caracterizado las propiedades bioquímicas y biofísicas que afectan este proceso y en colaboración con el Laboratorio de Microbiología Molecular y Estructural del IPM elucidamos la estructura tridimensional de CA-VLB, mostrando que se organiza en forma pseudohexagonal con una importante plasticidad conformacional. Por otro lado, generamos nanoanticuerpos dirigidos contra la cápside viral y estudiamos el efecto de la interacción con cápside en la modulación del autoensamblado.

Caracterización de las interacciones entre la CA-VLB y componentes intracelulares de la célula huésped.
El tránsito de la cápside viral entre la membrana plasmática y el núcleo celular depende de la interacción con diversas proteínas celulares. En otros modelos retrovirales se han descripto factores de restricción que perturban la conformación de la cápside generando condiciones anti-virales. Para el caso de los delta-retrovirus como el VLB no tenemos evidencias confirmadas sobre estos mecanismos. En el modelo VIH se ha demostrado que la interacción entre cápside y nucleoporinas participaría en este tránsito y la entrada al núcleo a través del poro nuclear. En función de la capacidad de CA-VLB de autoensamblar in vitro en estructuras supramacromoleculares tubulares o planas, y mediante el uso de técnicas de ologías de espectrometría de afinidad y masa, nuestro objetivo es identificar y caracterizar las interacciones entre BLV CA y los factores del huésped celular involucrados en este tráfico. También buscaremos socios de BLV CA que puedan actuar como sensores inmunes innatos al analizar los lisados celulares de las células permisivas y no permisivas a la infección BLV. Las células de ingeniería generadas por Francesca Di Nunzio en IP Paris, se utilizarán para identificar nuevos factores de restricción o socios virales funcionales mediante espectrometría de masas. También diseñaremos y purificaremos nanoanticuerpos contra BLV CA que serán etiquetados como enfoques de microscopía. Los resultados obtenidos en BLV se transferirán luego a la investigación de HTLV-1 para definir mecanismos comunes y diversos adoptados por estos retrovirus delta al establecer la infección viral.

Caracterización bioquímica, estructural e inmunológica de la proteína de la envoltura BLV.
El complejo de env de BLV tiene un papel crucial en la determinación de la infectividad viral, y es responsable de inducir la fusión de las membranas virales y celulares después del reconocimiento de los receptores específicos de la superficie celular.
Hemos optimizado la expresión del ectodominio de env soluble en células S2 de Drosophila, con un sitio de escisión de furina natural y alterado. La expresión de proteínas y la secreción en el sobrenadante se indujeron mediante metales divalentes, y la purificación de proteínas se realizó por cromatografía de afinidad usando una columna de StrepTactin seguida por cromatografía de exclusión por tamaño. El control de calidad de las proteínas se evaluó mediante espectrometría de masas. Este sistema debería permitir la producción de material suficiente para ensayos de cristalización, crio-microscopía electrónica de trímeros aislados y estudios biofísicos del complejo multimérico formado por las proteínas recombinantes.
Env es uno de los objetivos principales de las respuestas inmunitarias antivirales, que genera tanto anticuerpos neutralizantes humorales como inmunidad adaptativa específica de células T. Se ha informado para otros retrovirus que la presencia de un péptido inmunosupresor (isu) en la estructura de la glicoproteína Env podría ser importante en su capacidad para inmunomodular las respuestas inmunes. Estamos interesados en estudiar el efecto de las modificaciones de aminoácidos en el dominio isu en las respuestas de adaptación humoral y celular frente al desafío con glicoproteínas de Env modificadas. Esto nos permitirá comprender uno de los mecanismos implicados en la generación de resistencia utilizada por BLV para escapar de la respuesta inmune antiviral. Por otro lado, también esperamos identificar las modificaciones que reducen la actividad inmunosupresora de este dominio y, por lo tanto, aumentan su inmunogenicidad. Este resultado podría ser útil para el diseño racional de vacunas efectivas contra este retrovirus.
Mediante el uso de proteína purificada BLV Env también hemos desarrollado una nueva prueba ELISA para usar en el diagnóstico de la leucosis bovina enzoótica. En colaboración con ATGen ahora estamos generando un nuevo kit de diagnóstico EBL que se utilizará en un experimento de campo con más de 50.000 vacas lecheras.

La identificación de características genéticas se asocia con el control natural de EBL.
Dada la alta prevalencia de EBL en Uruguay, la estrategia para erradicar la enfermedad implementada en Europa y Oceanía es impracticable en nuestro país. Una estrategia de control alternativa mediante el uso de vacunas es prometedora, pero todavía no existen productos efectivos en el mercado. Teniendo en cuenta que los resultados recientes muestran que la EBL tiene un componente hereditario que alcanza 8%, una tercera estrategia para controlar la enfermedad involucraría la cría de rebaños al aumentar la frecuencia de genotipos asociados con la resistencia a la infección.
Hemos analizado en un hato experimental con alta prevalencia de infección por BLV, un grupo de animales definidos como «controladores» de la enfermedad y caracterizados por una baja carga proviral y bajos títulos de anticuerpos anti-BLV. Otros grupos se definieron como «no controladores» con alta carga proviral y altos títulos de anticuerpos específicos, y «negativos» sin presencia detectable de BLV.
Mediante el uso de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de estos animales, estamos caracterizando, en colaboración con Natalia Rego y Hugo Naya de la Unidad de Bioinformática IPMON, los representantes transcriptómicos de estos grupos por secuenciación masiva de ARNm (ARNseq). Esperamos identificar genes e isoformas expresados diferencialmente en animales «controladores» e interpretar estas diferencias en el contexto de procesos biológicos, ontologías de vías metabólicas sub o sobrerrepresentadas.

Líneas de investigación

Papel de la proteína intracelular TORID-1 en respuestas inmunitarias antitumorales.

Papel de las proteínas intracelulares TORID-1 y TORID-2 en la biología de la leucemia linfocítica crónica

Caracterización de pequeñas moléculas capaces de inhibir o activar la conductancia mediada por TORID-1 y 2.

Papel de la proteína intracelular TORID-1 en la obesidad y la inflamación inducida por la obesidad.

Estudio de drogas anti-inflamatorias no convencionales como inmunomoduladores en trasplante de órganos.

Líneas de investigación

Pequeños ARN derivados de ARNt e Y-ARNs como nuevas vías moleculares en cáncer y su potencial como fuente de nuevos biomarcadores diagnósticos en cáncer.
Nuestra principal línea de investigación, está orientada al rol de nuevas clases de pequeños ARN reguladores derivados de ARNt e Y-ARN como actores centrales en las respuestas celulares proliferativas y de supervivencia al estrés y su potencial como nuevos mecanismos moleculares en la iniciación y progresión del cáncer. El foco de nuestras actividades de investigación actuales está puesto en la biología extracelular de estos ARNs reguladores, y su capacidad de funcionar como moléculas señalizadoras entre células.
Parte de nuestros trabajos han demostrado que estos pequeños ARNs son secretados activamente por las células a través de vesículas extracelulares o fracciones extra-vesiculares, siendo transferidos a otras células constituyendo un nuevo mecanismo de comunicación intercelular y transferencia de información genética. Adicionalmente, su singular estabilidad en el medio extracelular permite su detección en fluidos biológicos posicionándose como potenciales biomarcadores moleculares séricos en cáncer humano.
Actualmente, en colaboración con el Servicio de Oncología Clínica del Hospital de Clínicas y el Instituto Nacional del Cáncer estamos estudiando el valor diagnóstico de pequeños ARNs circulantes derivados de ARNtGlu, ARNtGly e Y4-ARN en pacientes portadores de cáncer de pulmón.

Actividades de Investigación y Desarrollo con centros de Salud.
Nuestro laboratorio participa actualmente en una serie de iniciativas para incorporar nuevos biomarcadores diagnósticos en oncología, así como herramientas genómicas y moleculares.
Susceptibilidad genética al cáncer de mama. En forma conjunta con el Hospital de Clínicas de la Facultad de Medicina hemos incorporado en la rutina oncológica el estudio de mutaciones de un panel de 11 genes de predisposición hereditaria al cáncer de mama y ovario. Dicho procedimiento utiliza secuenciado profundo de última generación para el análisis incluyendo los genes BRCA1 y BRCA2 entre otros.
Biomarcadores de predicción terapéutica en cáncer de pulmón. Nuestro laboratorio realiza ensayos de hibridación in situ fluorescente (FISH) para detectar traslocaciones del gen ALK, como forma de predecir sensibilidad al tratamiento con inhibidores (Crizotinib) en cáncer de pulmón.

Líneas de investigación

CCDC28B y las proteínas BBS en la regulación de ciliogénesis y largo de las cilias.
En el laboratorio hemos venido caracterizando el rol biológico de proteínas BBS y una proteína asociada al síndrome denominada CCDC28B (por “coiled-coil domain containing protein 28B”). En pacientes, originalmente reportamos que una disminución en los niveles de CCDC28B, en un contexto con mutaciones en genes BBS, resulta en una presentación más severa del síndrome. CCDC28B interactúa físicamente con un número de proteínas BBS y nosotros hemos demostrado que es un nuevo regulador del largo de las cilias tanto en células como in vivo en el modelo de pez cebra. Sabemos que la función de CCDC28B en la cilia depende, al menos en parte, de su interacción con SIN1 y el motor molecular kinesina 1. Actualmente continuamos caracterizando CCDC28B para entender su mecanismo de acción y así comprender procesos relacionados con el control de la función ciliar.

Cilia targeting: similitudes con el proceso de transporte nuclear.
Las cilias son organelos conservados que si bien protruyen de la membrana plasmática y su interior está conectado con el citosol, poseen una composición particular y diferente que es importante para su función. Por ejemplo, distintos receptores y mediadores de vías de señalización se concentran en la cilia y el ingreso de moléculas al organelo está altamente regulado. Sin embargo, los mecanismos involucrados en dirigir moléculas a las cilias así como su ingreso no está del todo claro. Distintas líneas de evidencia muestran una alta similitud con la importación de proteínas al núcleo. En este contexto, hemos venido estudiando el rol de la maquinaria de importación nuclear en el transporte de proteínas a la cilia, estudiando proteínas que pueden localizarse en ambos compartimentos. En particular nos centramos en Gli2, un factor de transcripción de la vía de Hedgehog, que varía su localización como parte integral de la activación de la vía, y mostramos que tanto para ingresar al núcleo como a la cilia utiliza importinas, si bien no las mismas. Continuamos estudiando este proceso para entender el mecanismo en profundidad.

Proteínas asociadas al Síndrome de Bardet-Biedl (BBS) en el tráfico intracelular.
La caracterización funcional de proteínas BBS nos ha llevado a descubrir que en muchos casos cumplen funciones que exceden a las cilias. Por ejemplo, hemos demostrado que BBS7 es capaz de ingresar al núcleo donde modula la actividad de RNF2, una proteína remodeladora de cromatina. De esta manera, defectos en BBS7 resultan en cambios en expresión génica. Más recientemente también hemos documentado que CCDC28B necesita entrar al núcleo para cumplir su rol en la cilia, si bien todavía desconocemos el mecanismo. En colaboración con la Dra. Norann Zaghloul en la Universidad de Maryland, USA, hemos mostrado que las proteínas BBS no solo transportan proteínas a la cilia sino que tienen un rol más amplio en el transporte intracelular y la secreción de al menos algunas proteínas. Por ejemplo, hemos mostrado que BBS4 es requerida para la correcta secreción de FSTL1, una función que pensamos es relevante para entender el desarrollo de BBS.

El rol de las proteínas BBS y las cilias en el desarrollo de fenotipos asociados a ciliopatías.
Entender el rol biológico de proteínas BBS y CCDC28B es fundamental para comprender los mecanismos que subyacen al desarrollo de BBS y los fenotipos asociados. Por lo tanto, además de intentar disecar la función de estas proteínas a nivel celular y molecular, también evaluamos su función en modelos relevantes a la patología. Por ejemplo, hemos estudiado el rol de las cilias en el desarrollo de la retina utilizando el pez cebra como modelo de estudio. Actualmente estamos enfocados en el estudio de las proteínas BBS y las cilias en el proceso de adipogénesis y el desarrollo de obesidad. Por ejemplo, nuestros datos muestran que defectos en BBS4 llevan a una reducción en la secreción de FSTL1 (como ya mencionamos) y reportamos a FSTL1 como un nuevo regulador de la ciliogénesis y la adipogénesis. Estos estudios los estamos llevando adelante en una colaboración con el Dr. Escande en el marco del programa institucional Investigación en Diabetes, Inflamación, Enfermedades Cardiovasculares y Obesidad (INDICyO).

Líneas de investigación

En el marco del objeto de estudio del laboratorio —los biofármacos— se han desarrollado kits y/o metodologías analíticas específicas, a demanda del sector productivo. Ejemplo de ello han sido los siguientes proyectos:

Desarrollo de Metodologías para Cuantificar Proteínas y ADN Contaminantes Derivados de la Célula Huésped en Bio-farmacéuticos Recombinantes. Financiado por la Agencia de Nacional de Investigación e Innovación. (Proyecto ALIANZA entre Laboratorio Celsius S.A. e IP Montevideo) (2011 – 2012)

Desarrollo metodológico para cuantificación de inmunogenecidad generada por administración de Interferón beta1a en pacientes, mediante Un Bioensayo basado en cultivo celular y Real Time PCR. Financiado por Laboratorios Clausen S.A. (2010).

Participación en un Estudio Multicéntrico para la Determinación de la Potencia Biológica del Primer Estándar de Filgrastim de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP). (2012)