Biotecnología en Animales de Laboratorio

>>>Biotecnología en Animales de Laboratorio

La unidad proporciona apoyo regional de alto nivel en el campo de la modificación del genoma animal (ratones, ratas y rumiantes). Para eso, se ofrecen varias técnicas, como la microinyección pronuclear, la recombinación homóloga en células madre embrionarias, la inyección lentiviral, los transposones y el revolucionario sistema CRISPR/Cas9. Asociado a estas técnicas, ofrecemos criopreservación, fertilización in vitro y rederivación embrionaria en ratones. También proporcionamos ratones y ratas con alto estado genético y sanitario para los investigadores de la institución y la región.

Desde 2007 trabajamos con compañías biotecnológicas nacionales e internacionales ofreciendo ensayos biológicos in vivo en ratones y ratas, bajo los estándares GLP. Recibimos a estudiantes de pregrado y posgrado que realizan tesis usando diferentes tecnologías para obtener modelos de animales; organizamos cursos para técnicos y científicos, y ofrecemos pasantías para técnicos o veterinarios que administran sus propios servicios.

Nuestro personal es miembro de organismos relacionados con nuestro campo, como la Sociedad Internacional de Tecnologías Transgénicas (ISTT), el Comité de Articulación Institucional (CAI), la Comisión Nacional de Experimentación Animal (CNEA), la Asociación Uruguaya de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AUCyTAL), y la Federación Sudamericana de Ciencia de Animales de Laboratorio (FESSACAL).

Geraldine Schlapp, MSc
Asistente técnica
Estudiante de doctorado
gschlapp@pasteur.edu.uy
María Noel Meikle, MSc
Asistente técnica
manomeikle@pasteur.edu.uy
Ana Paula Arévalo, MSc
Técnica adjunta
Estudiante de doctorado
aparevalo@pasteur.edu.uy
Lic. Gabriel Fernández
Técnico adjunto
gabifergra@pasteur.du.uy
Ismael González
Asistente de mantenimiento
igonzalez@pasteur.edu.uy
Jorge Pórfido, PhD
Asistente técnico
jlporfido@pasteur.edu.uy
Marcela Souza, DVM
Estudiante de maestría
msouza@pasteur.edu.uy
Sergio Ancheta
Asistente de mantenimiento
sergioancheta@pasteur.edu.uy
Andrés Pereyra
Asistente de mantenimiento
apereyra@pasteur.edu.uy
Andrea Massa
Asistente de mantenimiento
amassa@pasteur.edu.uy
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  • Edición génica en roedores

  • Edición génica en rumiantes

  • Criopreservación de embriones y esperma de mamíferos

  • Fertilización in vitro de roedores y rumiantes

Instalaciones

  • Bioterio: área SPF (specific pathogen free) y Convencional

  • Laboratorio de Microinyección

  • Laboratorio de Técnicas de Reproducción Asistida (ART)

  • Laboratorio de Biología Molecular

Servicios

  • Generación de animales transgénicos empleando: tecnología CRISPR/Cas9, microinyección pronuclear de fragmentos de ADN, gene-targeting en células madre embrionarias, tecnología de Sleeping Beauty Transposons.

  • Criopreservación de embriones y esperma.

  • Rederivación de líneas murinas

  • Fertilización in vitro de líneas murinas

  • Cruzamientos y mantenimiento en condiciones SPF (libre de patógenos específicos) y convencionales de ratones de diversas cepas (C57BL/6J, BALB/cJ, DBA/2J, Nude, varios híbridos y aprox. 30 líneas transgénicas diferentes). Producción actual aproximada: 2000 ratones/mensuales.

  • Ensayos de estudio de la capacidad inmunomoduladora de bacterias probióticas

  • Ensayos de la actividad biológica de la eritropoyetina recombinante. Nuestro Bioterio está certificado por el Ministerio de Salud Pública

  • Ensayos de toxicidad para productos biotecnológicos (EPO, Filgen, Interferon)

  • Producción de Anticuerpos policlonales en ratón

Usuarios del bioterio IP Montevideo

Capacitación

Ofrecemos entrenamiento en:

  • Técnicas de producción de animales transgénicos y de reproducción asistida.

  • Manejo de patógenos BSL2 en procedimientos experimentales.

Por más información contactarse a ubal@pasteur.edu.uy

  • “Curso práctico de especialización CARD-IP Montevideo: “criopreservación de embriones y esperma murino”. 10-13 de setiembre, 2018. Institut Pasteur Montevideo. Financian: UNI-Biolac e IP Montevideo. Apoyan: CARD y Kumamoto University.

  • “Métodos Alternativos al uso de Animales de Experimentación: Evaluación in vitro de irritación (TG 439) y sensibilización cutánea (TG 442E)”. 21-24 de mayo, 2018. Institut Pasteur de Montevideo. Financian: Premasul y L’Oréal. Auspician: Protemca, Aucytal, CNEA.

  • “Curso Teórico- Práctico de Animales de Laboratorio”. 13-21 de marzo, 2017. Reunió a 19 conferencistas nacionales y uno internacional, y convocó a 21 estudiantes nacionales. Auspician FOCEM y PEDECIBA.

  • “Integrando las tecnologías del IP Montevideo”. Curso interno del IP Montevideo. Octubre 2017.

  • “TRANSGENIC TECHNOLOGIES in MODELING HUMAN DISEASES: Principles, Associated technologies, Animal Management and Ethics” – Junio 2017, Atenas, Grecia. Co-organizadores.

  • “Curso teórico-práctico de animales de laboratorio”, habilitante para la acreditación B-técnico experimentador- por la CNEA. 4-12 de abril de 2016.

  • Curso y simposio internacional “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS”. Setiembre 2015.

  • “Manejo, técnicas de administración de sustancias y obtención de muestras en ratones”. Curso interno para 20 investigadores que emplean ratones en el Bioterio del IP Montevideo. 2012-2015.

  • Curso internacional “Genetics of laboratory rodents”. Diciembre 2008 y 2011. Co-organizador junto a la Unidad de Genética Funcional del Institut Pasteur de Paris.

  • 2015‐2018 – Nuevas estrategias para la criopreservación de ovocitos y embriones ovinos producidos in vitro.

  • 2015‐2018 – Desarrollo de inoculantes para la movilización del fósforo como insumo en la producción agrícola. Participación: investigador.

  • 2015‐2018 – Desarrollo y validación de procesos para el estudio y valorización de nutracéuticos: creación de la primera empresa uruguaya del tipo. Participación: investigador.

  • 2016-2019 – Diseño y producción de nuevas variantes de la hormona folículo estimulante (FSH) para su empleo en especies de interés productivo. Participación: investigador.

  • 2012-2016 – Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690.

  • 2014-2016 – Evaluación por imagenología molecular del diabody anti-Tn en modelo murino de cáncer de pulmón. Tesis de Maestría.

  • 2014-2016 – Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. Tesis de Maestría.

  • 2014- 2016 – Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embriones in vitro.

  • 2012 – 2014 – Criopreservación de embriones ovinos producidos in vitro en diferentes estadios mediante dos métodos de vitrificación. Tesis de Maestría.

  • 2013-2014 – Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Beca de iniciación en la investigación.

  • 2013-2014 – Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Beca de iniciación en la investigación.

  • 2011-2014 – Una innovación tecnológica para la reproducción ovina en Uruguay: producción in vitro de embriones y su aplicación a gran escala.

  • 2012-2014 – Applied environmental toxicology: risk evaluation to environmental antropogenic estrogen exposition in a transgenic murine model Oct4-GFP. Colaboración.

  • Crispo M, Meikle MN, Schlapp G, Menchaca A. (2021). Ovarian superstimulatory response and embryo development using a new recombinant glycoprotein with eCG-like activity in mice. Theriogenology, 164, 31-35. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2021.01.012

  • Morande P, Yan X-J, Sepulveda-yanez JH, Seija N, Marquez ME, Sotelo N, Abreu C ,Crispo M, Fernández-Graña F, Rego N ,Bois T, Patrick Methot S, Palacios F, Remedi V, Rai K, Buschiazzo A, Di Noia J, Navarrete MA, Chiorazzi N, Oppezzo P. (2021). AID overexpression leads to aggressive murine CLL and nonimmunoglobulin mutations that mirror human neoplasms. Blood, 138 (3): 246–258. DOI: 10.1182/blood.2020008654.

  • Arévalo AP, Pagotto R, Pórfido JL, Daghero H, Segovia M, Yamasaki K, Varela B, Hill M, Verdes JM, Duhalde Vega M, Bollati-Fogolín M, Crispo M. (2021). Ivermectin reduces in vivo coronavirus infection in a mouse experimental model.  Sci Rep 11, 7132. DOI: 10.1038/s41598-021-86679-0

  • Capoano CA, Ortiz-Laquintana LA, Rodríguez-Casuriaga R, Crispo M, Schlapp G, Meikle MN, Mulet AP, Benavente R, Geisinger A. (2021). SPATS1 (spermatogenesis-associated, serine-rich 1) is not essential for spermatogenesis and fertility in mouse. PLoS ONE 16(5): e0251028. DOI: 10.1371/journal.pone.0251028

  • Berriel E, Freire T, Chiale C, Rodríguez E, Crispo M, Morón G, Fernández-Graña G, Berois N, Osinaga E. (2021). Human hydatid cyst fluid-induced therapeutic anti-cancer immune responses via NK1.1+ cell activation in mice. Cancer Immunol Immunother. Online ahead of print. DOI: 10.1007/s00262-021-02948-x

  • Graña-Baumgartner , Meikle A, Crispo M, Fernadez-Foren A, Neimaur K, Barrera N, Cuadro F, Dos Santos Neto PC, Bosolasco D, Núñez-Olivera R, Menchaca A, De Brun V. (2020). Local influence of the corpus luteum on the ipsilateral oviduct and early embryo development in the ewe. Theriogenology 15; 151:7-15. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.03.028.

  • Schlapp G, Meikle MN, Silva C, Fernández-Graña F, Menchaca A, Crispo C. (2020). Colony aging affects the reproductive performance of Swiss Webster females used as recipients for embryo transfer. Anim Reprod 24; 17(4):e20200524. DOI: 10.1590/1984-3143-AR2020-0524.

  • Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Souza-Neves M, Mulet AP, Tesson L, Chenouard V, Guiffès A, Heslan JM, Gantier M, Anegon I, Crispo M. (2020). Otoferlin gene editing in sheep via CRISPR-assisted ssODN-mediated Homology Directed Repair. Sci Rep 7; 10(1):5995. DOI: 10.1038/s41598-020-62879-y.

  • Meikle MN, Arévalo AP, Schlapp G, Fernández-Graña G, Menchaca A, Crispo M.(2020). Long-Term Effect of Environmental Enrichment on Reproductive Performance of Swiss Webster Mice and Their Female Offspring. Animals (Basel) 18;10(8):1438. DOI: 10.3390/ani10081438.

  • Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Mulet AP, Crispo M. (2020). CRISPR in livestock: From editing to printing. Theriogenology 150:247-254. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.01.063.

  • Dos santos neto PC , Vilariño M , Cuadro F , Barrera N, Crispo M, Menchaca A. (2020). Cumulus cells during in vitro fertilization and oocyte vitrification in sheep: Remove, maintain or add?. Cryobiology 92:161-167. DOI: 10.1016/j.cryobiol.2020.01.002.

  • Pagotto RM, Santamaría C, Harreguy MB, Abud J, Zenclussen ML, Kass L, Crispo M, Muñoz de Toro M, Rodriguez H, Bollati-Fogolin M. (2020). Perinatal exposure to Bisphenol A disturbs the early differentiation of male germ cells. Reprod Toxicol 98:117-124. DOI: 10.1016/j.reprotox.2020.09.004.

  • Cabrera A, Fresia P, Berna L. , Silveira C, Macías-Rioseco M, Arévalo AP, Crispo M, Pritsch O, Riet-Correa F, Giannitti F, Francia ME, Robello C. (2019). Isolation and molecular characterization of four novel Neospora caninum strains. Parasitol Res 118(12):3535-3542. DOI: 10.1007/s00436-019-06474-9

  • Meikle MN, Schlapp G., Menchaca A., Crispo M. Minimum volume spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos. Cryobiology.

  • Barrera N, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Bosolasco D, Mulet AP, Crispo M, Menchaca A. Impact of delipidated estrous sheep serum supplementation on in vitro maturation, cryotolerance and endoplasmic reticulum stress gene expression of sheep oocytes. PLoS One 13(6). (hyperlink en el t{itulo del art{iculo_ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29912910)

  • Cuadro F, Dos Santos Neto PC, Pinczak A, Barrera N, Crispo M, Menchaca A. (2018). Serum progesterone concentrations during FSH superstimulation of the first follicular wave affect embryo production in sheep. Anim Reprod Sci, 196:205-210. DOI: 10.1016/j.anireprosci.2018.08.011.

  • Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Souza-Neves M, Crispo M. (2018). From reproductive technologies to genome editing in small ruminants: an embryo journey. Anim Reprod, 15 (1), 984-995. DOI: 10.21451/1984-3143-AR2018-0022

  • Schlapp G, Fernández-Graña F, Arévalo AP, Crispo M. (2018). Establishment of an environmental microbiological monitoring program in a mice barrier facility. An Acad Bras Cienc, 90(3):3155-3164. DOI: 10.1590/0001-3765201820180043.

  • Barrera N, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Bosolasco D, Mulet AP, Crispo M, Menchaca A. (2018). Impact of delipidated estrous sheep serum supplementation on in vitro maturation, cryotolerance and endoplasmic reticulum stress gene expression of sheep oocytes. PLoS One,13(6):e0198742. DOI: 10.1371/journal.pone.0198742. eCollection 2018.

  • Menchaca A, Cuadro F, Bosolasco D, Barrera N, De Brun V, Crispo M. (2018). Oocyte developmental competence is improved by relatively greater circulating progesterone concentrations during preovulatory follicular growth. Anim Reprod Sci,195:321-328. DOI: 10.1016/j.anireprosci.2018.06.010

  • Meikle MN, Schlapp G, Menchaca A, Crispo M. (2018). Minimum volume spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos. Cryobiology, 84:77-81. DOI: 10.1016/j.cryobiol.2018.07.005.

  • dos Santos-Neto P.C., Cuadro F., Barrera N., Crispo M., Menchaca A. 2017. Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos. Cryobiology. 78(8): 14.

  • Menchaca A., Schlapp G., Meikle M.N., Crispo M. 2017. Transgenesis and Gene Edition in Mammals. Reference Module in Life Sciences. Elsevier. V.1: 1-9 pp (Book chapter).

  • Menchaga A., AP Mulet, P. Dos Santos Neto, M. Crispo 2017. Transgenesis and Gene Edition in Small Ruminants. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.: 41 1, 2017

  • Mulet AP, Perelmuter K, Bollati-Fogolin M, Crispo M, Grompone G. 2017. Forkhead Box Protein O1 is Linked to Anti-Inflammatory Probiotic Bacteria Acting through Nuclear Factor-κB Pathway. J Microb Biochem Technol Volume 9(3):074-081

  • A. MENCHACA; I. ANEGóN; B. WHITELAW; H. BALDASSARRE; M. CRISPO- New insights and current tools for genetically engineered (GE) sheep and goats. Theriogenology, p.: 1 – 10, 2016.

  • • A. MENCHACA; N. BARRERA; P. DOS SANTOS-NETO; F. CUADRO; M. CRISPO. Advances and limitations of in vitro embryo production in sheep and goats. Animal Reproduction, v.: 13 3, p.: 273 – 278, 2016.

  • Crispo M, Mulet AP, Tesson L, Barrera N, Cuadro F, dos Santos-Neto PC, Nguyen TH, Crénéguy A, Brusselle L, Anegón I, Menchaca A. Efficient Generation of Myostatin Knock-Out Sheep Using CRISPR/Cas9 Technology and Microinjection into Zygotes. PLoS One. 2015 Aug 25;10(8):e0136690. doi: 10.1371/journal.pone.0136690

  • Schlapp G, Goyeneche L, Fernández G, Menchaca A, Crispo M. Administration of the nonsteroidal anti-inflammatory drug tolfenamic acid at embryo transfer improves maintenance of pregnancy and embryo survival in recipient mice. J Assist Reprod Genet. 2015 Feb;32(2):271-5. doi: 10.1007/s10815-014-0378-x. Epub 2015 Jan 6.

  • P. DOS SANTOS; M. VILARIÑO; N. BARRERA; F. CUADRO; M. CRISPO; A. MENCHACA. Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods. Cryobiology, v.: 70, p.: 17 – 22, 2015.

  • Crispo M, Vilariño M, dos Santos-Neto PC, Núñez-Olivera R, Cuadro F, Barrera N, Mulet AP, Nguyen TH, Anegón I, Menchaca A. Embryo development, fetal growth and postnatal phenotype of eGFP lambs generated by lentiviral transgenesis. Transgenic Res. 2015 Feb;24(1):31-41. doi: 10.1007/s11248-014-9816-x. Epub 2014 Jul 22.

  • Crispo M, Van Maele L, Tabareau J, Cayet D, Errea A, Ferreira AM, Rumbo M, Sirard JC. Transgenic mouse model harboring the transcriptional fusion ccl20- luciferase as a novel reporter of pro-inflammatory response. PLoS One. 2013 Nov 12;8(11):e78447. doi: 10.1371/journal.pone.0078447.

  • M. CRISPO; SCHLAPP G; CÁRDENAS M; D. GONZÁLEZ-MACIEL; M RUMBO. Optimization of transgenesis conditions for the generation of CXCL2-luciferase reporter mice line. EJB Electronic Journal of Biotechnology, v.: 16 6, 2013.

  • A. MENCHACA; M. VILARIÑO; M. CRISPO; DE CASTRO T; E RUBIANES. New approaches to superovulation and embryo transfer in small ruminants. Reproduction Fertility and Development, v.: 22 1, p.: 113 – 118, 2010.

  • A. MENCHACA; M VILARIÑO; M. CRISPO; A PINCZAK; E RUBIANES. Day 0 Protocol: superstimulatory treatment initiated in absence of a dominant follicle improves ovarian response and embryo yield in goats. Theriogenology, v.: 68, p.: 1111 – 1117, 2007.