Biotecnología en Animales de Laboratorio
La unidad proporciona apoyo regional de alto nivel en el campo de la modificación del genoma animal (ratones, ratas y rumiantes). Para eso, se ofrecen varias técnicas, como la microinyección pronuclear, la recombinación homóloga en células madre embrionarias, la inyección lentiviral, los transposones y el revolucionario sistema CRISPR/Cas9. Asociado a estas técnicas, ofrecemos criopreservación, fertilización in vitro y rederivación embrionaria en ratones. También proporcionamos ratones y ratas con alto estado genético y sanitario para los investigadores de la institución y la región.
Desde 2007 trabajamos con compañías biotecnológicas nacionales e internacionales ofreciendo ensayos biológicos in vivo en ratones y ratas, bajo los estándares GLP.
Recibimos a estudiantes de pregrado y posgrado que realizan tesis usando diferentes tecnologías para obtener modelos de animales; organizamos cursos para técnicos y científicos, y ofrecemos pasantías para técnicos o veterinarios que administran sus propios servicios.
Nuestro personal es miembro de organismos relacionados con nuestro campo, como la Sociedad Internacional de Tecnologías Transgénicas (ISTT), el Comité de Articulación Institucional (CAI), la Comisión Nacional de Experimentación Animal (CNEA), la Asociación Uruguaya de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AUCyTAL), y la Federación Sudamericana de Ciencia de Animales de Laboratorio (FESSACAL).
Integrantes
Pedro Pablo Casaravilla
Asistente de mantenimiento
Líneas de investigación
Edición génica en roedores.
Edición génica en rumiantes.
Criopreservación de embriones y esperma de mamíferos.
Fertilización in vitro de roedores y rumiantes.
Equipos principales
INSTALACIONES
- Bioterio: área SPF (specific pathogen free) y Convencional.
- Laboratorio de Microinyección.
- Laboratorio de Técnicas de Reproducción Asistida (ART).
- Laboratorio de Biología Molecular.
ACTIVIDADES
- Generación de animales transgénicos empleando: tecnología CRISPR/Cas9, microinyección pronuclear de fragmentos de ADN, gene-targeting en células madre embrionarias, tecnología de Sleeping Beauty Transposons.
- Criopreservación de embriones y esperma.
- Rederivación de líneas murinas.
- Fertilización in vitro de líneas murinas.
- Cruzamientos y mantenimiento en condiciones SPF (libre de patógenos específicos) y convencionales de ratones de diversas cepas (C57BL/6J, BALB/cJ, DBA/2J, Nude, varios híbridos y aprox. 30 líneas transgénicas diferentes). Producción actual aproximada: 2000 ratones/mensuales.
- Ensayos de estudio de la capacidad inmunomoduladora de bacterias probióticas.
- Ensayos de la actividad biológica de la eritropoyetina recombinante. Nuestro Bioterio está certificado por el Ministerio de Salud Pública.
- Ensayos de toxicidad para productos biotecnológicos (EPO, Filgen, Interferon).
- Producción de Anticuerpos policlonales en ratón.
Por consultas, por favor dirigirse a ubal@pasteur.edu.uy
Cursos
- “Curso práctico de especialización CARD-IP Montevideo: “criopreservación de embriones y esperma murino”. 10-13 de setiembre, 2018. Institut Pasteur Montevideo. Financian: UNI-Biolac e IP Montevideo. Apoyan: CARD y Kumamoto University.
- “Métodos Alternativos al uso de Animales de Experimentación: Evaluación in vitro de irritación (TG 439) y sensibilización cutánea (TG 442E)”. 21-24 de mayo, 2018. Institut Pasteur de Montevideo. Financian: Premasul y L’Oréal. Auspician: Protemca, Aucytal, CNEA.
- “Curso Teórico- Práctico de Animales de Laboratorio”. 13-21 de marzo, 2017. Reunió a 19 conferencistas nacionales y uno internacional, y convocó a 21 estudiantes nacionales. Auspician FOCEM y PEDECIBA.
- “Integrando las tecnologías del IP Montevideo”. Curso interno del IP Montevideo. Octubre 2017.
- “TRANSGENIC TECHNOLOGIES in MODELING HUMAN DISEASES: Principles, Associated technologies, Animal Management and Ethics” – Junio 2017, Atenas, Grecia. Co-organizadores.
- “Curso teórico-práctico de animales de laboratorio”, habilitante para la acreditación B-técnico experimentador- por la CNEA. 4-12 de abril de 2016.
- Curso y simposio internacional “ADVANCES IN THE GENERATION OF GENETICALLY MODIFIED (GM) ANIMAL MODELS – International Mini Symposium: TRANSGENIC TECHNOLOGIES, THE LATEST TRENDS”. Setiembre 2015.
- “Manejo, técnicas de administración de sustancias y obtención de muestras en ratones”. Curso interno para 20 investigadores que emplean ratones en el Bioterio del IP Montevideo. 2012-2015.
- Curso internacional “Genetics of laboratory rodents”. Diciembre 2008 y 2011. Co-organizador junto a la Unidad de Genética Funcional del Institut Pasteur de Paris.
Proyectos
2022- … – Evaluación de la combinación de racotumomab con inhibidores de checkpoints inmunológicos en
modelos murinos singénicos de expresión de NeuGc
2021- … – Preclinical development of a nanotechnology-based aerosol with tocilizumab to fight COVID-19
2020- … – Mini-intestinos: una potente herramienta in vitro para el reemplazo de animales de experimentación
2015‐2018 – Nuevas estrategias para la criopreservación de ovocitos y embriones ovinos producidos in vitro.
2015‐2018 – Desarrollo de inoculantes para la movilización del fósforo como insumo en la producción agrícola. Participación: investigador.
2015‐2018 – Desarrollo y validación de procesos para el estudio y valorización de nutracéuticos: creación de la primera empresa uruguaya del tipo. Participación: investigador.
2016-2019 – Diseño y producción de nuevas variantes de la hormona folículo estimulante (FSH) para su empleo en especies de interés productivo. Participación: investigador.
2012-2016 – Estudio de los mecanismos responsables de potenciales efectos probióticos de la cepa Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690.
2014-2016 – Evaluación por imagenología molecular del diabody anti-Tn en modelo murino de cáncer de pulmón. Tesis de Maestría.
2014-2016 – Influencia de la progesterona en el desarrollo folicular sobre la maduración y fertilidad ovocitaria en ovinos. Tesis de Maestría.
2014-2016 – Efecto del contenido lipídico sobre la maduración y vitrificación de ovocitos ovinos: Mecanismo de acción y su aplicación a la producción de embriones in vitro.
2012-2014 – Criopreservación de embriones ovinos producidos in vitro en diferentes estadios mediante dos métodos de vitrificación. Tesis de Maestría.
2013-2014 – Caracterización de un modelo murino inducible para el estudio de las vías de señalización de la insulina. Beca de iniciación en la investigación.
2013-2014 – Derivación y caracterización de una línea de células madre embrionarias (ESC) murinas Oct4-GFP en ausencia de suero y de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Beca de iniciación en la investigación.
2011-2014 – Una innovación tecnológica para la reproducción ovina en Uruguay: producción in vitro de embriones y su aplicación a gran escala.
2012-2014 – Applied environmental toxicology: risk evaluation to environmental antropogenic estrogen exposition in a transgenic murine model Oct4-GFP. Colaboración.
Publicaciones
vacio
2023
- Paula Faral-Tello, Gonzalo Greif, Selva Romero, Andrés Cabrera, Cristina Oviedo, Telma González, Gabriela Libisch, Ana Paula Arévalo, Belén Varela, José Manuel Verdes, Martina Crispo, Yester Basmadjián, Carlos Robello. Trypanosoma cruzi Isolates Naturally Adapted to Congenital Transmission Display a Unique Strategy of Transplacental Passage. Microbiology Spectrum, 2023. DOI: 10.1128/spectrum.02504-22 http://dx.doi.org/10.1128/spectrum.02504-22
2022
- Matías Fabregat, Sofía Niño-Rivero, Sabrina Pose, Magdalena Cárdenas-Rodríguez, Mariana Bresque, Karina Hernández, Victoria Prieto-Echagüe, Geraldine Schlapp, Martina Crispo, Patricia Lagos, Natalia Lago, Carlos Escande, Florencia Irigoín, Jose L. Badano. Generation and characterization of Ccdc28b mutant mice links the Bardet-Biedl associated gene with mild social behavioral phenotypes. PLoS Genetics, v.: 18 2022. DOI: 10.1371/journal.pgen.1009896 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pgen.1009896
- Maite Duhalde Vega, Daniela Olivera, Gustavo Gastão Davanzo, Mauricio Bertullo, Verónica Noya, Gabriela Fabiano De Souza, Stéfanie Primon Muraro, Icaro Castro, Ana Paula Arévalo, Martina Crispo, Germán Galliussi, Sofía Russo, David Charbonnier, Florencia Rammauro, Mathías Jeldres, Catalina Alamón, Valentina Varela, Carlos Batthyany, Mariela Bollati-Fogolín, Pablo Oppezzo, Otto Pritsch, José Luiz Proença-Módena, Helder I. Nakaya, Emiliano Trias, Luis Barbeito, Ignacio Anegon, María Cristina Cuturi, Pedro Moraes-Vieira, Mercedes Segovia, Marcelo Hill. PD-1/PD-L1 blockade abrogates a dysfunctional innate-adaptive immune axis in critical coronavirus disease. Science Advances, v.: 8 2022. DOI: 10.1126/sciadv.abn6545 http://dx.doi.org/10.1126/sciadv.abn6545
- Ayelen Toro, Sofia Lage-Vickers, Juan Bizzotto, Felipe Vilicich, Agustina Sabater, Gaston Pascual, Sabrina Ledesma-Bazan, Pablo Sanchis, Maria Sol Ruiz, Ana Paula Arevalo, Jorge L. Porfido, Mercedes Abbate, Rocio Seniuk, Estefania Labanca, Nicolas Anselmino, Nora M. Navone, Daniel F. Alonso, Elba Vazquez, Martina Crispo, Javier Cotignola, Geraldine Gueron. Pin-Pointing the Key Hubs in the IFN-? Pathway Responding to SARS-CoV-2 Infection. Viruses, v.: 14 p.:2180 2022. DOI: 10.3390/v14102180 http://dx.doi.org/10.3390/v14102180
- José Renato Passos, Denise Guerreiro , Kamila Otávio , Pedro Dos Santos Neto, Marcela Souza Neves , Federico Cuadro , Richard Nuñez Olivera , Martina Crispo , Maria Júlia Bezerra , Renato Silva , Laritza Lima , José Ricardo Figueiredo , Ivan Bustamante Filho , Alejo Menchaca , Arlindo Moura. Global proteomic analysis of preimplantational ovine embryos produced in vitro. Reproduction in Domestic Animals, 2022. DOI: 10.1111/rda.14122 http://dx.doi.org/10.1111/rda.14122
- Hellen Daghero , Flora Doffe , Belén Varela , Victoria Yozzi , José Manuel Verdes , Martina Crispo , Mariela Bollati-Fogolín , Romina Pagotto. Jejunum-derived NF-kB reporter organoids as 3D models for the study of TNF-alpha-induced inflammation. Scientific Reports, v.: 12 2022. DOI: 10.1038/s41598-022-18556-3 http://dx.doi.org/10.1038/s41598-022-18556-3
- Ana Paula Arévalo , Romina Castelli , Manuel Ibarra , Martina Crispo , Victoria
Calzada. In Vivo Evaluation of Sgc8-c Aptamer as a Molecular Imaging Probe for Colon Cancer in a Mouse Xenograft Model. International Journal of Molecular Sciences, v.: 23 p.:2466 2022. DOI: 10.3390/ijms23052466 http://dx.doi.org/10.3390/ijms23052466 - José Renato S. Passos , Denise D. Guerreiro , Kamila S. Otávio , Pedro C. Dos
Santos Neto , Marcela Souza Neves , Federico Cuadro , Richard Nuñez Olivera, Martina Crispo , Fábio R. Vasconcelos , Maria Julia B. Bezerra , Renato F. Silva , Laritza F. Lima , José Ricardo Figueiredo , Ivan C. Bustamante Filho, Alejo Menchaca, Arlindo A. Moura. How in vitro maturation changes the proteome of ovine cumulusoocyte complexes. Molecular Reproduction and Development, 2022. DOI: 10.1002/mrd.23638 http://dx.doi.org/10.1002/mrd.23638
2021
- Crispo M, Meikle MN, Schlapp G, Menchaca A. (2021). Ovarian superstimulatory response and embryo development using a new recombinant glycoprotein with eCG-like activity in mice. Theriogenology, 164, 31-35. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2021.01.012
- Morande P, Yan X-J, Sepulveda-yanez JH, Seija N, Marquez ME, Sotelo N, Abreu C ,Crispo M, Fernández-Graña F, Rego N ,Bois T, Patrick Methot S, Palacios F, Remedi V, Rai K, Buschiazzo A, Di Noia J, Navarrete MA, Chiorazzi N, Oppezzo P. (2021). AID overexpression leads to aggressive murine CLL and nonimmunoglobulin mutations that mirror human neoplasms. Blood, 138 (3): 246–258. DOI: 10.1182/blood.2020008654.
- Arévalo AP, Pagotto R, Pórfido JL, Daghero H, Segovia M, Yamasaki K, Varela B, Hill M, Verdes JM, Duhalde Vega M, Bollati-Fogolín M, Crispo M. (2021). Ivermectin reduces in vivo coronavirus infection in a mouse experimental model. Sci Rep 11, 7132. DOI: 10.1038/s41598-021-86679-0
- Capoano CA, Ortiz-Laquintana LA, Rodríguez-Casuriaga R, Crispo M, Schlapp G, Meikle MN, Mulet AP, Benavente R, Geisinger A. (2021). SPATS1 (spermatogenesis-associated, serine-rich 1) is not essential for spermatogenesis and fertility in mouse. PLoS ONE 16(5): e0251028. DOI: 10.1371/journal.pone.0251028
- Berriel E, Freire T, Chiale C, Rodríguez E, Crispo M, Morón G, Fernández-Graña G, Berois N, Osinaga E. (2021). Human hydatid cyst fluid-induced therapeutic anti-cancer immune responses via NK1.1+ cell activation in mice. Cancer Immunol Immunother. Online ahead of print. DOI: 10.1007/s00262-021-02948-x
2020
- Graña-Baumgartner , Meikle A, Crispo M, Fernadez-Foren A, Neimaur K, Barrera N, Cuadro F, Dos Santos Neto PC, Bosolasco D, Núñez-Olivera R, Menchaca A, De Brun V. (2020). Local influence of the corpus luteum on the ipsilateral oviduct and early embryo development in the ewe. Theriogenology 15; 151:7-15. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.03.028.
- Schlapp G, Meikle MN, Silva C, Fernández-Graña F, Menchaca A, Crispo C. (2020). Colony aging affects the reproductive performance of Swiss Webster females used as recipients for embryo transfer. Anim Reprod 24; 17(4):e20200524. DOI: 10.1590/1984-3143-AR2020-0524.
- Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Souza-Neves M, Mulet AP, Tesson L, Chenouard V, Guiffès A, Heslan JM, Gantier M, Anegon I, Crispo M. (2020). Otoferlin gene editing in sheep via CRISPR-assisted ssODN-mediated Homology Directed Repair. Sci Rep 7; 10(1):5995. DOI: 10.1038/s41598-020-62879-y.
- Meikle MN, Arévalo AP, Schlapp G, Fernández-Graña G, Menchaca A, Crispo M.(2020). Long-Term Effect of Environmental Enrichment on Reproductive Performance of Swiss Webster Mice and Their Female Offspring. Animals (Basel) 18;10(8):1438. DOI: 10.3390/ani10081438.
- Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Mulet AP, Crispo M. (2020). CRISPR in livestock: From editing to printing. Theriogenology 150:247-254. DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.01.063.
- Dos santos neto PC , Vilariño M , Cuadro F , Barrera N, Crispo M, Menchaca A. (2020). Cumulus cells during in vitro fertilization and oocyte vitrification in sheep: Remove, maintain or add?. Cryobiology 92:161-167. DOI: 10.1016/j.cryobiol.2020.01.002.
- Pagotto RM, Santamaría C, Harreguy MB, Abud J, Zenclussen ML, Kass L, Crispo M, Muñoz de Toro M, Rodriguez H, Bollati-Fogolin M. (2020). Perinatal exposure to Bisphenol A disturbs the early differentiation of male germ cells. Reprod Toxicol 98:117-124. DOI: 10.1016/j.reprotox.2020.09.004.
2019
- Cabrera A, Fresia P, Berna L. , Silveira C, Macías-Rioseco M, Arévalo AP, Crispo M, Pritsch O, Riet-Correa F, Giannitti F, Francia ME, Robello C. (2019). Isolation and molecular characterization of four novel Neospora caninum strains. Parasitol Res 118(12):3535-3542. DOI: 10.1007/s00436-019-06474-9
2018
- Meikle MN, Schlapp G., Menchaca A., Crispo M. Minimum volume spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos. Cryobiology.
- Barrera N, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Bosolasco D, Mulet AP, Crispo M, Menchaca A. Impact of delipidated estrous sheep serum supplementation on in vitro maturation, cryotolerance and endoplasmic reticulum stress gene expression of sheep oocytes. PLoS One 13(6). (hyperlink en el t{itulo del art{iculo_ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29912910)
- Cuadro F, Dos Santos Neto PC, Pinczak A, Barrera N, Crispo M, Menchaca A. (2018). Serum progesterone concentrations during FSH superstimulation of the first follicular wave affect embryo production in sheep. Anim Reprod Sci, 196:205-210. DOI: 10.1016/j.anireprosci.2018.08.011.
- Menchaca A, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Souza-Neves M, Crispo M. (2018). From reproductive technologies to genome editing in small ruminants: an embryo journey. Anim Reprod, 15 (1), 984-995. DOI: 10.21451/1984-3143-AR2018-0022
- Schlapp G, Fernández-Graña F, Arévalo AP, Crispo M. (2018). Establishment of an environmental microbiological monitoring program in a mice barrier facility. An Acad Bras Cienc, 90(3):3155-3164. DOI: 10.1590/0001-3765201820180043.
- Barrera N, Dos Santos Neto PC, Cuadro F, Bosolasco D, Mulet AP, Crispo M, Menchaca A. (2018). Impact of delipidated estrous sheep serum supplementation on in vitro maturation, cryotolerance and endoplasmic reticulum stress gene expression of sheep oocytes. PLoS One,13(6):e0198742. DOI: 10.1371/journal.pone.0198742. eCollection 2018.
- Menchaca A, Cuadro F, Bosolasco D, Barrera N, De Brun V, Crispo M. (2018). Oocyte developmental competence is improved by relatively greater circulating progesterone concentrations during preovulatory follicular growth. Anim Reprod Sci,195:321-328. DOI: 10.1016/j.anireprosci.2018.06.010
- Meikle MN, Schlapp G, Menchaca A, Crispo M. (2018). Minimum volume spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos. Cryobiology, 84:77-81. DOI: 10.1016/j.cryobiol.2018.07.005.
2017
- dos Santos-Neto P.C., Cuadro F., Barrera N., Crispo M., Menchaca A. 2017. Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos. Cryobiology. 78(8): 14.
- Menchaca A., Schlapp G., Meikle M.N., Crispo M. 2017. Transgenesis and Gene Edition in Mammals. Reference Module in Life Sciences. Elsevier. V.1: 1-9 pp (Book chapter).
- Menchaga A., AP Mulet, P. Dos Santos Neto, M. Crispo 2017. Transgenesis and Gene Edition in Small Ruminants. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.: 41 1, 2017
- Mulet AP, Perelmuter K, Bollati-Fogolin M, Crispo M, Grompone G. 2017. Forkhead Box Protein O1 is Linked to Anti-Inflammatory Probiotic Bacteria Acting through Nuclear Factor-κB Pathway. J Microb Biochem Technol Volume 9(3):074-081
2016
- A. MENCHACA; I. ANEGóN; B. WHITELAW; H. BALDASSARRE; M. CRISPO- New insights and current tools for genetically engineered (GE) sheep and goats. Theriogenology, p.: 1 – 10, 2016.
- A. MENCHACA; N. BARRERA; P. DOS SANTOS-NETO; F. CUADRO; M. CRISPO. Advances and limitations of in vitro embryo production in sheep and goats. Animal Reproduction, v.: 13 3, p.: 273 – 278, 2016.
2015
- Crispo M, Mulet AP, Tesson L, Barrera N, Cuadro F, dos Santos-Neto PC, Nguyen TH, Crénéguy A, Brusselle L, Anegón I, Menchaca A. Efficient Generation of Myostatin Knock-Out Sheep Using CRISPR/Cas9 Technology and Microinjection into Zygotes. PLoS One. 2015 Aug 25;10(8):e0136690. doi: 10.1371/journal.pone.0136690
- Schlapp G, Goyeneche L, Fernández G, Menchaca A, Crispo M. Administration of the nonsteroidal anti-inflammatory drug tolfenamic acid at embryo transfer improves maintenance of pregnancy and embryo survival in recipient mice. J Assist Reprod Genet. 2015 Feb;32(2):271-5. doi: 10.1007/s10815-014-0378-x. Epub 2015 Jan 6.
- P. DOS SANTOS; M. VILARIÑO; N. BARRERA; F. CUADRO; M. CRISPO; A. MENCHACA. Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods. Cryobiology, v.: 70, p.: 17 – 22, 2015.
2014
- Crispo M, Vilariño M, dos Santos-Neto PC, Núñez-Olivera R, Cuadro F, Barrera N, Mulet AP, Nguyen TH, Anegón I, Menchaca A. Embryo development, fetal growth and postnatal phenotype of eGFP lambs generated by lentiviral transgenesis. Transgenic Res. 2015 Feb;24(1):31-41. doi: 10.1007/s11248-014-9816-x. Epub 2014 Jul 22.
2013
- Crispo M, Van Maele L, Tabareau J, Cayet D, Errea A, Ferreira AM, Rumbo M, Sirard JC. Transgenic mouse model harboring the transcriptional fusion ccl20- luciferase as a novel reporter of pro-inflammatory response. PLoS One. 2013 Nov 12;8(11):e78447. doi: 10.1371/journal.pone.0078447.
- M. CRISPO; SCHLAPP G; CÁRDENAS M; D. GONZÁLEZ-MACIEL; M RUMBO. Optimization of transgenesis conditions for the generation of CXCL2-luciferase reporter mice line. EJB Electronic Journal of Biotechnology, v.: 16 6, 2013.
2010
- A. MENCHACA; M. VILARIÑO; M. CRISPO; DE CASTRO T; E RUBIANES. New approaches to superovulation and embryo transfer in small ruminants. Reproduction Fertility and Development, v.: 22 1, p.: 113 – 118, 2010.
2007
- A. MENCHACA; M VILARIÑO; M. CRISPO; A PINCZAK; E RUBIANES. Day 0 Protocol: superstimulatory treatment initiated in absence of a dominant follicle improves ovarian response and embryo yield in goats. Theriogenology, v.: 68, p.: 1111 – 1117, 2007.