Cristalografía de Proteínas

Equipos principales

Robot de cristalización – Honeybee963®:
El robot Honeybee963® (Digilab) es un sistema de mesada para la automatización y miniaturización de experimentos de cristalización de proteínas usando el método de difusión de vapor en gota sentada. Los dispensadores synQUAD® combinan válvulas micro-solenoides de alta velocidad con bombas y jeringas de alta resolución, dispensando volúmenes de hasta 100nL. Actualmente utilizamos nanogotas de 200-300nL maximizando las probabilidades de cristalización. El brazo de 96 agujas permite el dispensado rápido de las soluciones que se encuentran en el reservorio a placas de 96 pocillos. Tres agujas synQUAD® independientes proceden a dispensar volúmenes de hasta tres proteínas distintas, con volúmenes variables elegidos a través de la programación del robot. La automatización permite ensayar cientos de condiciones potenciales de cristalogénesis en cuestión de minutos, permitiendo aumentar el espacio de rastreo, un requisito necesario para aumentar la probabilidad de éxito.

Robot de producción y optimización de cristales – Alchemist DT®:
El Alchemist DT ® (Formulatrix) es un robot de mesada de manejo de líquidos para la producción y optimización de condiciones de cristalización. Los líquidos son dispensados en placas SBS, Linbro® o Nextal® de manera confiable, precisa y exacta en un rango de volúmenes entre 1 μl a 10 ml. Debido a su tecnología, la ausencia de tuberías evita el descarte de desechos y elimina toda contaminación cruzada.
El programa informático que acompaña el sistema (CrystalTrak™) está diseñado específicamente para cristalografía de proteínas. Una vez que la placa es diseñada, Crystal Trak™ automáticamente calcula la receta y define las soluciones madre necesarias. 26 soluciones madre pueden ser almacenadas simultáneamente en el equipo. Las herramientas para el manejo de estas soluciones y el rastreo por código de barras aseguran que las soluciones madres correctas y los volúmenes necesarios estén disponibles en el equipo antes de que la placa sea generada.

Generador de rayos X – MicroMax-007HF®:
El Micromax007-HF® (Rigaku) es un generador de rayos X con una fuente de diámetro focal efectivo de 0.07mm. Equipado con un ánodo de cobre rotatorio, es capaz de generar una salida de 1200 W y un brillo de 31kW/mm2. En combinación con la óptica instalada (Varimax-HF®, Rigaku), que consiste de espejos multicapa confocales, los rayos X enfocados en la muestra cristalina son muy brillantes y pueden utilizarse para tomar medidas con varios propósitos. Podemos resolver estructuras con átomos que dispersan en forma anómala, a la longitud de onda fija de 1.5418Å (como átomos de S, I, Cs, lantánidos, entre los más utilizados). También se pueden resolver estructuras que permitan ser abordadas por reemplazo molecular, y en fin, colectas de datos para el refinamiento de estructuras a alta resolución (por ej. incluyendo ligandos, inhibidores, drogas, variantes de proteínas por mutaciones puntuales, etc).

Detector de área de tipo placa de imagen – MAR345®:
El detector MAR345® (Mar Research) instalado en una mesa MAR345dtb® es un detector de área de tipo placa de imagen que nos permite colectar datos hasta 1.2Å de resolución gracias a la configuración geométrica que hemos diseñado (aprovechando al máximo el ángulo 2θ). Esta geometría de oscilación según un único ángulo Φ, se acompaña de un conveniente motor que rota según χ que facilita el montado de cristales en condiciones criogénicas. Los ciclos de lectura van desde 108 a 34 segundos, dependiendo del tamaño de los píxeles y del diámetro de la placa efectivamente escaneada.
El sistema de lectura del Mar345 es único en el sentido que utiliza un solo láser de 85mW de alta performance, el cual brinda más de 0.8 µJ/pixel en la placa. Esto asegura que un porcentaje extremadamente alto de centros-F atrapados son transformados en luminiscencia fotoestimulada.