Ingeniería de Proteínas
Las proteínas recombinantes —aquellas producidas en el laboratorio mediante ingeniería genética en células distintas a las que se producen en la naturaleza— han demostrado un alto impacto en la investigación básica y en el campo biomédico, para la fabricación de fármacos. Sin embargo, en muchos casos no es posible obtener un producto estable, soluble y homogéneo, lo que limita sus aplicaciones. Varias estrategias se desarrollaron en las últimas décadas para superar estas limitaciones.
En este sentido, nuestro grupo ha generado un conjunto de vectores que facilita los pasos de clonado y permite la evaluación de varios parámetros que pueden mejorar la expresión soluble de una proteína diana.
En el contexto de las herramientas terapéuticas relacionadas con el cáncer, nuestro grupo se centró recientemente en la generación de proteínas de unión artificiales conocidas como Affitins. Esta clase de proteínas presenta una amplia gama de ventajas en comparación con los anticuerpos terapéuticos clásicos que podrían tenerse en cuenta en el desarrollo de enfoques terapéuticos.
Integrantes
Líneas de investigación
Suite vector y Proteínas de Unión Artificial (ABP)
Nuestro laboratorio ha desarrollado un conjunto de vectores que permiten la evaluación de diferentes promotores y proteínas que potencian la solubilidad, a través de un estrategia de clonado eficiente. Esta suite de vectores se amplió de manera de generar un conjunto de vectores de modo de incluir la evaluación de expresión de proteínas recombinantes en diferentes compartimentos celulares y hospedadores celulares para superar las limitaciones encontradas al trabajar con una única localización subcelular y un único tipo de huésped, Además, estos vectores también permiten la evaluación de estrategias de purificación alternativas para el mejoramiento de los rendimientos de la proteína target.
En el contexto de las herramientas terapéuticas relacionadas con el cáncer, nuestro grupo se centró recientemente en la generación de proteínas de unión artificiales conocidas como Afitinas. Esta clase de proteínas presenta una amplia gama de ventajas en comparación con los anticuerpos terapéuticos clásicos que podrían tenerse en cuenta en el desarrollo de enfoques terapéuticos.
En comparación con los anticuerpos terapéuticos clásicos, las Afitinas son capaces de mantener constantes de alta afinidad incluso cuando su peso molecular sigue siendo pequeño. Esto podría ser muy útil en neoplasmas linfoides, con el fin de obtener acceso a los tejidos sólidos como órganos linfoides secundarios, donde las células leucémicas reciben señales de supervivencia que adquieren condiciones favorables de proliferación. En esta línea, recientemente se ha creado en nuestro laboratorio una nueva generación de tecnologías de ingeniería de proteínas combinatorias. Los resultados en esta línea han permitido proponer el uso de estas proteínas artificiales de unión como inhibidores de glicosidasa selectivos versátiles y, potencialmente, como inhibidores enzimáticos en general, que podrían preverse para futuras estrategias de terapia tumoral (Correa et al., Plos One, 2014).
Equipos principales
- ÄKTAxpress / ÄKTA Pure and ÄKTA Purifier:
- Benchtop Bioreactor BIOSTAT® B plus (Prokaryotic culture):
- CelliGen 310 Bioreactor (Eukaryotic culture):
- BelloCell 3000 Bioreactor (Eukaryotic culture)
- EmulsiFlex-C5 Homogenizer
- Multitron 2 Incubated Shaker:
Cursos
- “Integrating IP Montevideo technologies”. Curso modular para investigadores y técnicos del IP Montevideo 2017.
- Curso de postgrado: “Introducción al análisis estructural y funcional de proteínas”, Institut Pasteur de Montevideo. Setiembre-Noviembre 2014.
- Curso de postrado: “Expression, Purification and Crystallization of Recombinant Proteins by High-throughput Methodologies”. Febrero 2013.
- Curso de postgrado: “Expresión de Proteínas Recombinantes”. PEDECIBA- Biología- Maestría en Biotecnología, Facultad de Ciencias – Institut Pasteur de Montevideo. 5 de noviembre – 10 de diciembre de 2008.
Servicios
- Expresión de proteínas recombinantes (PR) en sistemas procarióticos y eucarióticos:
— Expresión de PR en E. coli
— Expresión de PR en células de mamíferos
- Optimización de la expresión de proteínas recombinantes solubles
- Replegamiento y producción soluble de cuerpos de inclusión bacterianos
- Mantenimiento de colecciones de vectores de expresión y cepas bacterianas
Proyectos
FCE_3_2016_1_125765 Diseño y desarrollo de proteínas de unión artificiales con potencial uso en la biomedicina. Responsable Científico: Agustín Correa
Publicaciones
vacio
2022
- Rizza JD, Ortega C, Carrión F, Fló M, Correa A. Production, purification and characterization of a double-tagged TEV protease. Protein Expr Purif. 2022 Mar;191:106021. doi: 10.1016/j.pep.2021.106021. Epub 2021 Nov 16. PMID: 34798273.
- Ortega C, Oppezzo P, Correa A. Overcoming the Solubility Problem in E. coli: Available Approaches for Recombinant Protein Production. Methods Mol Biol. 2022;2406:35-64. doi: 10.1007/978-1-0716-1859-2_2. PMID: 35089549.
2018
- Multi-Compartment and Multi-Host Vector Suite for Recombinant Protein Expression and Purification. Ortega C, Prieto D, Abreu C, Oppezzo P, Correa A. Front Microbiol. 2018, Jun 27;9:1384. doi: 10.3389/fmicb.2018.01384. eCollection 2018.
2015
- Overcoming the solubility problem in E. coli: available approaches for recombinant protein production. Correa A, Oppezzo P. Methods Mol Biol. 2015;1258:27-44. doi: 10.1007/978-1-4939-2205-5_2. Review.
2014
- Potent and specific inhibition of glycosidases by small artificial binding proteins (affitins). Correa A, Pacheco S, Mechaly AE, Obal G, Béhar G, Mouratou B, Oppezzo P, Alzari PM, Pecorari F. PLoS One. 2014 May 13;9(5):e97438. doi: 10.1371/journal.pone.0097438. eCollection 2014.
- Generation of a vector suite for protein solubility screening. Correa A, Ortega C, Obal G, Alzari P, Vincentelli R, Oppezzo P. Front Microbiol. 2014, Feb 25;5:67. doi: 10.3389/fmicb.2014.00067. eCollection 2014.
2011
- Tuning different expression parameters to achieve soluble recombinant proteins in E. coli: advantages of high-throughput screening. Correa A, Oppezzo P. Biotechnol J. 2011 Jun;6(6):715-30. doi: 10.1002/biot.201100025. Epub 2011 May 12. Review.